Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,674

THE ALLELIC POLYMORPHISM OF HLA-DRB1 GENE IN CHRONIC MYELOLEUKEMIA

Ovsyannikova E.G. 1 Israpilova Z.M. 1 Zaklyakova L.V. 1 Popov E.A. 1
1 Astrakhan state medical academy, Astrakhan
The problem of resistance to glivecon therapy in patients with chronic myeloleukemia (CML) is in the process of study. The investigation deals with allelic polymorphism of HLA-DRB1 gene in patients with CML receiving glivecon therapy. It was stated that the resistance to development of chronic myeloleukemia may be marked by presence of phenotype specificiency HLA-DRB1*13(06); makers of speedy progression CML with lethal outcome may be of specificiency HLA-DRB1*01 and 12(05); HLA-DRB1* 15(02) gene may have protective effect and characterizes positive outcome of CML. The immunogenetic investigation may be recommended as the additional method of risk definition and prognosis of CML.
chronic myeloleukemia (CML)
glivecon
HLA-DRB1

В терапии хронического миелолейкоза (ХМЛ) в настоящее время происходят перемены глобального масштаба. На смену эмпирической терапии пришла таргетная терапия, что значительно улучшает бессобытийную и общую выживаемость больных, выводит их на недоступный ранее уровень качества жизни (3, 9). Главным патогенетическим событием является хромосомная транслокация t (9; 22), (q34; q11). В результате образуется химерный ген BCR-ABL, продукт которого - белок р210 является тирозинкиназой с повышенной активностью. Ведущим эффектом тирозинкиназ является их способность к усилению пролиферации и снижению апоптоза в гемопоэтических предшественниках [2, 7]. Несмотря на улучшение результатов терапии ХМЛ, связанных с применением ингибиторов тирозинкиназ, полный цитогенетический ответ удается получить у 70-87 % больных в хронической фазе [3, 4, 8]. Это определяет необходимость дальнейшего изучения патогенеза злокачественной трансформации клеток и опухолевой прогрессии, а также расшифровки механизмов развития резистентности к терапии ингибиторами тирозинкиназ у больных ХМЛ [10].

В настоящее время не вызывает сомнений, что процесс онкогенеза заключается в патологических изменениях вначале на молекулярном, а затем на клеточном уровне, а предрасположенность к злокачественным новообразованиям и опухолевая прогрессия могут модифицироваться аллельными полиморфизмами различных генов [5]. Одной из наиболее полиморфных генетических систем человека является система HLA. Выявление ассоциативных связей с заболеваниями позволяет использовать продукты HLA не только в качестве маркеров наследственной предрасположенности, но и прогнозировать особенности течения заболеваний. Изучению продуктов HLA у больных гемобластозами посвящено большое количество исследований. В то же время проблема хронического миелолейкоза освещена в единичных работах. В одном из последних исследований показано, что молекулы HLA II класса более, чем молекулы HLA I класса, ассоциируются с резистентностью к развитию ХМЛ [6]. Однако не изучены ассоциативные связи генов HLA II класса у больных хроническим миелолейкозом с развитием резистентности к лечению гливеком.

Цель исследования: изучить аллельный полиморфизм гена HLA-DRB1 у больных хроническим миелолейкозом, получающих лечение гливеком, и определить иммуногенетические маркеры предрасположенности и прогноза.

Материалы и методы исследования

Исследование проводилось на основе собственных наблюдений в период с 2006 по 2011 г. В исследование включены 50 больных ХМЛ русской национальности. Возраст больных колебался от 23 до 78 лет. Средний возраст составлял 50,3 ± 15,0 лет, соотношение мужчин и женщин в исследовании 1:1. Длительность лечения гливеком составила от 1 года до 5 лет. Продолжительность заболевания до начала терапии гливеком была от 0 до 87 месяцев. В качестве контрольных данных были использованы результаты генотипирования 94 доноров - жителей Астраханской области русской национальности [1].

Все больные имели клинико-морфологическое и цитогенетическое подтверждение диагноза хронического миелолейкоза. Характер ответа на лечение определялся согласно критериям Европейского общества по изучению хронического миелолейкоза European Leukemia Net (ELN-2009) [7].

В процессе работы проводились молекулярно-генетические исследования крови методом ПЦР в реальном времени (количественная оценка экспрессии химерного гена BCR-ABL типа р210), ДНК-типирование с помощью метода ПЦР (определение генов HLA II класса); исследования костного мозга: цитологические (миелограмма), цитохимические, цитогенетические (определение транслокации t (9; 22) (q34; q11), молекулярно-цитогенетические (флуоресцентная in situ гибридизация хромосом (FISH) с ДНК зондом к слитному гену BCR-ABL).

Для определения показателя достоверности результатов был использован непараметрический критерий - Х2. Критерий Х2 вычислялся по формуле Holdene, учитывая малый объем выборок, была применена модифицированная формула с поправкой Yates на непрерывность выборки. Значения Х2, превышающие 3,841 (что соответствует р < 0,05) рассматривались как показатель достоверной разницы между частотами в сравниваемых группах. Помимо показателя статистической достоверности, использовался показатель силы ассоциации - RR (relative risk) - относительный риск этиологической фрак- ции - EF (для RR > 1), превентивной фракции - PF (для RR < 1). Величина RR, равная 1, указывает на отсутствие ассоциации. RR > 1 (положительная ассоциация) означает, что ген чаще встречается у больных; если RR < 1, это указывает на снижение частоты гена у больных.

Результаты исследования и их обсуждение

Нами были изучены закономерности распределения аллелей генов HLA-DRB1 у больных хроническим миелолейкозом по сравнению с контрольной группой. Распределение специфичностей представлено в табл. 1.

Таблица 1. Ассоциации аллелей HLA -DRB1 с хроническим миелолейкозом

Аллели HLA

ХМЛ

n = 50

Контроль

n = 94

χ2

RR

EF

PF

N

 %

N

 %

DR B1*01

9

18

14

14,9

0,06

1,27

0,038

-

DRB1*15(02)

8

16

27

28,7

3,61

0,49

-

0,149

DRB1*16(02)

5

10

5

5,3

0,50

1,97

0,049

-

DRB1*17(03)

10

20

10

10,6

1,67

2,09

0,104

-

DRB1*04

7

14

19

20,2

1,32

0,67

-

0,067

DRB1*11(05)

17

34

31

32,9

0,00

1,05

0,017

-

DRB1*12(05)

2

4

3

3,2

0,05

1,35

0,010

-

DRB1*13(06)

11

22

36

38,3

4,71 p < 0,05

0,47

-

0,219

DRB1*14(06)

3

6

0

0

3,19

13,93

0,056

-

DRB1*07

17

34

30

31,9

0,00

1,10

0,032

-

DRB1*08

4

8

4

4,3

0,30

1,95

0,039

-

DRB1*09

3

6

5

5,3

0,05

1,20

0,010

-

DRB1*10

0

0

3

3,2

3,57

0,26

0

0

DRB1*x

4

8

Н/Д

Н/Д

-

-

-

-

Примечание: Н/Д - нет данных.

Как представлено в табл. 1, у больных хроническим миелолейкозом установлена статистически значимая отрицательная ассоциация со специфичностью DRB1*13, по сравнению с контрольной группой 22 % против 38,3 % (RR-0,47, PF-0,219, p < 0,05). Из этого следует, что резистентность к развитию ХМЛ в популяции русских астраханской геногеографической зоны маркируется наличием в фенотипе специфичности DRB1*13. Кроме того, следует отметить, что риск развития ХМЛ в 13,93 раза выше при наличии в генотипе специфичности DRB1*14(06), однако различия не достигли достоверного уровня.

Далее больные были распределены по статусу: «жив»-«умер», с целью определения маркеров благоприятного и неблагоприятного прогноза ХМЛ на фоне проведенной терапии гливеком. На первом этапе исследовалось распределение специфичностей HLА-DRB1 у больных хроническим миелолейкозом, успешно получавших лечение гливеком в течение 5 лет. Полученные данные представлены в табл. 2.

Таблица 2. Генный профиль HLA -DRB1 у больных ХМЛ: статус «жив»

Аллели HLA

Жив n = 44

Контроль n = 94

χ2

RR

EF

PF

n

 %

n

 %

DRB1*01

6

13,6

14

14,9

0,21

0,91

-

0,009

DRB1*15(02)

8

18,2

27

28,7

2,36

0,57

-

0,126

DRB1*16(02)

5

11,4

5

5,3

0,85

2,27

0,063

-

DRB1*17(03)

8

18,2

10

10,6

0,91

1,87

0,085

-

DRB1*04

7

15,9

19

20,2

0,70

0,77

-

0,046

DRB1*11(05)

15

34,1

31

32,9

0,00

1,06

0,019

-

DRB1*12(05)

1

2,3

3

3,2

0,71

0,90

-

0,003

DRB1*13(06)

9

20,5

36

38,3

5,19 p < 0,025

0,43

-

0,232

DRB1*14(06)

3

6,8

0

0

3,73

15,94

0,064

-

DRB1*07

15

34,1

30

31,9

0,00

1,11

0,034

-

DRB1*08

4

9,1

4

4,3

0,55

2,23

0,050

-

DRB1*09

3

6,8

5

5,3

0,00

1,37

0,019

-

DRB1*10

0

0

3

3,2

3,33

0,29

0

0

DRB1*x

4

9,1

Н/Д

Н/Д

-

-

-

-

Примечание: Н/Д - нет данных.

Из табл. 2 следует, что зарегистрировано достоверное снижение частоты HLА-DRB1*13(06) в группе больных ХМЛ, успешно получающих лечение по настоящее время, по сравнению с контрольной группой 20,5 % против 38,3 % (RR-0,43, PF-0,232, p < 0,025). Это подтверждает ранее сделанное нами заключение об отрицательной ассоциации ХМЛ с данным геном. Далее мы проанализировали генный профиль HLА у больных ХМЛ, получавших лечение гливеком и умерших в результате прогрессии заболевания (табл. 3).

Таблица 3. Аллельный полиморфизм HLA -DRB1 у больных ХМЛ: статус «умер»

Аллели HLA

Умер N = 6

Контроль n = 94

χ2

RR

EF

PF

n

 %

n

 %

DRB1*01

3

50

14

14,9

2,75

5,55

0,410

-

DRB1*15(02)

0

0

27

28,7

4,04

p < 0,05

0,19

0

0

DRB1*16(02)

0

0

5

5,3

2,39

1,25

0

0

DRB1*17(03)

2

33,3

10

10,6

1,02

4,47

0,259

-

DRB1*04

0

0

19

20,2

3,10

0,30

0

0

DRB1*11(05)

2

33,3

31

32,9

0,18

1,12

0,036

-

DRB1*12(05)

1

16,7

3

3,2

0,31

7,13

0,143

-

DRB1*13(06)

2

33,3

36

38,3

0,46

0,89

-

0,045

DRB1*14(06)

0

0

0

0

-

-

-

-

DRB1*07

2

33,3

30

31,9

0,14

1,17

0,050

-

DRB1*08

0

0

4

4,3

2,53

1,55

0

0

DRB1*09

0

0

5

5,3

2,39

1,25

0

0

DRB1*10

0

0

3

3,2

2,82

2,01

0

0

DRB1*x

0

0

Н/Д

Н/Д

-

-

-

-

Примечание: Н/Д - нет данных

Как представлено в табл. 3, у умерших больных ХМЛ, получавших лечение гливеком, имеется достоверное снижение по сравнению с контролем частоты HLА-DRB1*15(02) - 0 % против 28,7 % (RR-0,19, p < 0,025). Из этого следует, что ген DRB1*15(02) маркирует благоприятный прогноз ХМЛ. Необходимо отметить, что риск неблагоприятного течения ХМЛ с летальным исходом в 5,5 раза выше при наличии в генотипе группы аллелей HLА-DRB1*01 (RR-5,55, ЕF-0,41) и в 7,13 раза выше при HLА-DRB1*12(05) (RR-7,13, ЕF-0,143), однако различия не достигли статистической значимости. Следующим шагом нашего анализа было сравнение антигенного профиля больных ХМЛ: статус «жив» и «умер» между собой (табл. 4).

Таблица 4. Сравнение аллельного полиморфизма HLA-DRB1 у больных ХМЛ

Аллели HLA

Жив n = 44

Умер n = 6

χ2

RR

EF

PF

N

 %

n

 %

DRB1*01

6

13,6

3

50

7,51 p < 0,01

0,17

-

0,043

DRB1*15(02)

8

18,2

0

0

0,30

3,03

1,122

-

DRB1*16(02)

5

11,4

0

0

0,21

1,81

0,051

-

DRB1*17(03)

8

18,2

2

33,3

2,00

0,42

-

0,215

DRB1*04

7

15,9

0

0

0,18

2,60

0,098

-

DRB1*11(05)

15

34,1

2

33,3

0,18

0,95

-

0,022

DRB1*12(05)

1

2,3

1

16,7

7,83 p < 0,01

0,13

-

0,136

DRB1*13(06)

9

20,5

2

33,3

1,54

0,48

-

0,194

DRB1*14(06)

3

6,8

0

0

0,07

1,10

0,006

-

DRB1*07

15

34,1

2

33,3

0,18

0,96

-

0,022

DRB1*08

4

9,1

0

0

0,001

1,44

0,028

-

DRB1*09

3

6,8

0

0

0,07

1,10

0,006

-

DRB1*10

0

0

0

0

-

-

-

-

DRB1*x

4

9,1

0

0

0,001

1,44

0,028

-

Проведённый анализ показал достоверное снижение в группе больных ХМЛ - «жив» по сравнению с группой «умер» частоты HLА-DRB1*01 - 13,6 % против 50 % (RR-0,17, PF-0,043, p < 0,01) и HLА-DRB1*12(05) - 2,3 % против 16,7 % (RR-0,13, PF-0,136, p < 0,01). Возвращаясь к табл. 2, - данные гены уже проявлялись: в 5,5 и 7,13 раз, соответственно, чаще у умерших больных, но не достигли уровня достоверности.

Анализируя табл. 2, 3, 4, можно сделать заключение, что у больных ХМЛ, получающих лечение гливеком, наличие генов HLА-DRB1*01 и HLА-DRB1*12(05) предполагает быструю прогрессию заболевания с летальным исходом.

Выводы

Резистентность к развитию ХМЛ маркируется наличием в фенотипе специфичности HLA-DRB1*13(06); маркерами быстрой прогрессии ХМЛ с летальным исходом являются специфичности HLА-DRB1*01 и HLА-DRB1*12(05); ген HLА-DRB1*15(02) обладает протективным эффектом и характеризует благоприятный исход ХМЛ; иммуногенетическое исследование может быть внедрено в практику в качестве дополнительного метода определения риска и прогноза хронического миелолейкоза; учитывая полученные данные необходимо продолжить поиск иммуногенетических маркеров прогноза течения ХМЛ

Рецензенты:

  • Астахин А.В., д.м.н., профессор, зам. главного врача по клинико-экспертной работе ГУЗ «Александро-Мариинская областная клиническая больница», г. Астрахань;
  • Эсаулова Т.А., д.м.н., профессор, зав. терапевтической службой НУЗ медико-санитарной части Газпрома, г. Астрахань.

Работа поступила в редакцию 09.09.2011.