Хронический тонзиллит относится к наиболее распространенным заболеваниям верхних дыхательных путей в различных возрастных группах. Причиной хронического тонзиллита чаще бывает вирусная инфекция, которая в дальнейшем сменяется бактериальной [2]. Согласно современным данным, хронический тонзиллит – полиэтиологическое заболевание, в генезе которого играют роль многочисленные факторы, однако причиной обострения воспалительного процесса в глотке чаще является воздействие микроорганизмов. Основными возбудителями является: Streptococcusα-haemolyticus, β- haemolyticus, γ- haemolyticus, Staphylococcusaureus, CNSStaphylococcus, Neisseriaspp., Haemophilusspp, Corynebacteriumspp, грибы рода Candida [3].
Вирусы могут играть роль «протравы», способствующей развитию бактериальной инфекции. Обосновано мнение о том, что инфекция играет основную роль не в возникновении, но в хронизации тонзиллита [4, 5, 6].
В настоящее время много исследований посвящено вирусу Эпштейна-Барр (ВЭБ) в развитии различных воспалительных заболеваний, в том числе и хронического тонзиллита.
ВЭБ обнаруживается у 90–92 % населения земного шара [1]. Важной особенность ВЭБ является избирательное инфицирование В-лимфоцитов через специфический рецептор CD21. Долгое время В-лимфоциты считались единственной мишенью ВЭБ в организме больного. Однако позже было установлено, что инфицируются также клетки эпителия носоглотки и нейтрофилы. Возможно инфицирование Т-лимфоцитов, а также дендритных клеток, несущих на поверхности рецептор CD21 [7, 8].
Иммунные нарушения при хроническом тонзиллите носят комплексный характер, они касаются как клеточного, так и гуморального иммунитета, влекут за собой утяжеление течения, учащение осложнений заболевания.
Как для оптимизации терапии, так и для предупреждения формирования в дальнейшем индуцированного иммунодефицитного состояния для лечения хронического тонзиллита был применен препарат рекомбинантного α-интерферона: реаферон-ЕС-липинт.
Целью нашей работы явилось исследование содержания цитокинов у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, до и после проведенного иммунотропного лечения.
Материалы и методы исследования
В исследование включено 73 человека (59 женщин и 14 мужчин) с диагнозом «хронический тонзиллит», выставленным на основании жалоб пациентов, анамнестических данных, клинической картины. У всех пациентов произведен забор материала из зева на микрофлору и чувствительность к антибиотикам, а также методом ПЦР определяли ДНК вируса Эпштейна-Барр. Из них у 53 человек диагностирована ВЭБ-инфекция. Пациенты были разделены на две группы: 1-я группа (26 человек) получали помимо стандартной схемы лечения иммуномодулирующую терапию реаферон-ЕС-липинтом, 2-я группа (27 человек) получали стандартное лечение. У всех обследованных пациентов хронический тонзиллит был в стадии обострения, о чем свидетельствовали наличие клинических симптомов, данные анамнеза и объективного осмотра. Больные обследованы в период разгара заболевания (1 день болезни), угасания клинических симптомов (7-й день) и в период реконвалесценции (28-й день). Контролем служили 20 человек – практически здоровых добровольцев, сопоставимых по полу и возрасту.
Для выявления ДНК ВЭБ использовали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Материалом для выделения ДНК ВЭБ служили кровь, слюна и эпителиальные клетки небных миндалин. Методом иммуноферментного анализа (ИФА) определяли EBV-VCA-IgM, EBV-EA-IgG, EBV-NA-IgG в сыворотке крови. Определение цитокинов (IL-1β, IL-17, IL-10, IL-4) в слюне проводили с помощью специфических реактивов фирмы «R&DDiagnostic. Inc» (США) методом сэндвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), содержание секреторного IgA определяли в слюне методом твердофазного ИФА с применением специфических реактивов ЗАО «Вектор-Бест» (Россия).
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью компьютерных программ MicrosoftExel, Biostat с применением непараметрических методов и корреляционного анализа. Результаты представляли в виде средней арифметической (M ± m). Достоверность различия определяли при p < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
У пациентов, получавших реаферон-ЕС-липинт, отмечалось уменьшение продолжительности основных клинических симптомов хронического тонзиллита по сравнению с пациентами 2-й группы. Уже в течение первых суток пациенты отмечали уменьшение болевых ощущений в глотке. Полное исчезновение болевого симптома на 3-й день с момента лечения отметили 86,7 % пациентов основной группы. При фарингоскопии отечность и гиперемия слизистой оболочки глотки, казеозные массы в лакунах исчезли на 4-й день у пациентов, получавших лечение препаратом α-интерферона, и на 7-й день у пациентов с хроническим тонзиллитом вирусной природы, получавших стандартное лечение.
В процессе лечения реафероном-ЕС-липинтом не отмечалось ни одного случая нежелательных побочных эффектов применения препарата.
Исходно до назначения терапии оценка локального цитокинового профиля у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией (табл. 1) позволила установить существенное увеличение уровня провоспалительных цитокинов IL-1β, IL-17 в первые и на 7 сутки исследования с постепенным снижением к 28 дню (p < 0,05). Уровень ИЛ-17 в период реконвалесценции был значительно ниже по сравнению с пациентами 2 группы. Установлено раннее повышение противовоспалительного цитокина IL-10 исходно и в период угасания клинических симптомов с последующим снижением до нормальных величин на 28 сутки (p < 0,05). Причем показатели данного цитокина на 7 день исследования превышали уровень ИЛ-10 у пациентов, получавших стандартное лечение. Уровень IL-4 исходно не отличался от группы контроля, достигал максимально высокого значения на 7-е сутки и сохранялся высоким в период реконвалесценции. Однако в период угасания клинических симптомов у пациентов 2 группы показатели данного цитокина значительно были ниже (p ˂ 0,05).
Таблица 1
Показатели уровня цитокинов у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, получавших лечение реаферон-ЕС-липинтом, и у людей контрольной группы.
|
№ п/п |
Показатели, пг/мл |
Исследуемые группы |
|||
|
Пациенты 1 группы (n = 26) |
Здоровые (n = 20) |
||||
|
1-й день |
7-й день |
28-й день |
|||
|
1 |
ИЛ-1β |
23,68 ± 2,6* |
12,38 ± 2,8* |
7,25 ± 2,31 |
5,04 ± 2,37 |
|
2 |
ИЛ-17 |
56,72 ± 1,9* |
43,60 ± 8,9* |
16,18 ± 6,2# |
11,1 ± 1,82 |
|
3 |
ИЛ-10 |
13,47 ± 3,0* |
12,29 ± 2,7*# |
8,3 ± 0,6 |
5,31 ± 0,43 |
|
4 |
ИЛ-4 |
7,8 ± 0,9 |
11,45 ± 1,2*# |
10,4 ± 0,63* |
3,33 ± 0,07 |
Примечание. Статистическая достоверность: с группой контроля – * – p˂0,05; между группами сравнения – # – p˂0,05.
Следовательно, у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, получавших иммуномодулирующее лечение, в разгар заболевания значительно повышен уровень IL-1β, IL-17, IL-10. При угасании клинических симптомов существенно возрастал уровень IL-10 и IL-4 по сравнению со второй группой, однако достоверно снижался уровень IL-17.
Установлено повышение провоспалительного цитокина IL-1β в слюне пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, получавших стандартное лечение (табл. 2) в первые и 7 сутки исследования с последующим достоверным снижением в период реконвалесценции. IL-17 остается высоким на всем протяжении этапа мониторинга. Уровень противовоспалительного цитокина IL-10 повышался в первые сутки исследования с последующим снижением до нормальных величин с 7 по 28 сутки (p < 0,05). Оценка уровня IL-4 у пациентов 2 группы показала, что исходно его значение не отличалось от контрольной группы, с дальнейшим его увеличением в период стихания клинических симптомов и сохранением высокого значения до 28 суток. Следовательно, в период разгара заболевания при выраженных клинических проявлениях у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с вирусной инфекцией, не получавших иммунотропное лечение, существенно увеличен уровень IL-1β, IL-17, IL-10, IL-4. Причем у пациентов этой группы значение IL-10 и IL-4 ниже, а содержание IL-17 – выше, чем у пациентов, получавших реаферон-ЕС-липинт в период стихания клинических симптомов.
Таблица 2
Показатели уровня провоспалительных цитокинов у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, получавших стандартное лечение, и у людей контрольной группы
|
№ п/п |
Показатели, пг/мл |
Исследуемые группы |
|||
|
Пациенты 2 группы (n = 27) |
Здоровые (n = 20) |
||||
|
1-й день |
7-й день |
28-й день |
|||
|
1 |
ИЛ-1β |
29,07 ± 6,5* |
18,86 ± 4,2* |
10,19 ± 2,8 |
5,04 ± 2,37 |
|
2 |
ИЛ-17 |
50,23 ± 2,6* |
48,76 ± 4,0* |
41,02 ± 3,5* |
11,1 ± 1,82 |
|
3 |
ИЛ-10 |
9,97 ± 1,04* |
6,45 ± 0,59# |
6,32 ± 0,99 |
5,31 ± 0,43 |
|
4 |
ИЛ-4 |
5,6 ± 2,58 |
7,05 ± 1,25*# |
6,44 ± 0,63* |
3,33 ± 0,07 |
Примечание: статистическая достоверность: с группой контроля – * – p˂0,05; между группами сравнения – # – p˂0,05.
При сравнении локального цитокинового статуса двух исследуемых групп были выявлены следующие различия: уровень IL-10 сохранялся высоким с 1 по 7 дни исследования у пациентов, получавших реаферон-ЕС-липинт. Уровень IL-4 значительно повышался в разгар заболевания у данных пациентов. Показатели IL-17 достоверно снижались в период реконвалесценции.
Заключение
Выявлены особенности локального иммунитета при хроническом тонзиллите, ассоциированном с ВЭБ-инфекцией, получавших реаферон-ЕС-липинт. ВЭБ-инфекция характеризуется высоким уровнем ИЛ-10 в период стихания клинических симптомов, увеличением ИЛ-4 на 7 сутки исследования и значительным снижением ИЛ-17 в период реконвалесценции. Регистрировались признаки активности Th2-клеток (повышение уровня ИЛ-4) с периода угасания клинических симптомов.
Сочетанное применение стандартной схемы лечения и реаферон-ЕС-липинта способствовало более существенной положительной динамике показателей цитокинового статуса. В период угасания клинических симптомов у них зафиксирована более высокая продукция противовоспалительных цитокинов (ИЛ-10, ИЛ-4).
Применение иммуномодулятора при хроническом тонзиллите, ассоциированном с ВЭБ-инфекцией, обеспечило снижение ИЛ-17 в период реконвалесценции.
Результаты исследования применения препарата реаферон-ЕС-липинт в амбулаторной практике подтвердили целесообразность его использования и эффективность препарата в комплексном лечении хронического тонзиллита, ассоциированного с ВЭБ-инфекцией, что подтверждается полученными клинико-лабораторными данными, в том числе данными цитокинового исследования.
Как показало данное исследование, препарат реаферон-ЕС-липинт хорошо переносится пациентами. Побочные эффекты при применении препарата отсутствовали.
Рецензенты:
Просекова Е.В., д.м.н., профессор, зав. кафедрой биологической химии, клинической лабораторной диагностики, общей и клинической иммунологии, ГБОУ ВПО ВГМУ Минздравсоцразвития России, г. Владивосток;
Иванис В.А., д.м.н., профессор кафедры инфекционных болезней, ГБОУ ВПО «ВГМУ» Минздравсоцразвития России, г. Владивосток.
Работа поступила в редакцию 21.03.2013.