В настоящее время в мировой медицинской практике применяется значительное количество мягких лекарственных форм в качестве средств для местного лечения и профилактики заболеваний кожи, мягких тканей и слизистых оболочек различной этиологии. Одним из перспективных направлений в разработке новых лекарственных средств для местного применения, в частности в стоматологии, является использование иммунотропных препаратов, что обосновано быстро формирующейся резистентностью организма к антибактериальным средствам, снижением иммунологической реактивности населения, наличием маскирующих форм иммунопатологии, обусловливающих прогрессирование патологии и терапевтическую толерантность; при этом отмечается, что местное использование иммунотропных средств часто является более эффективным, чем системное введение, когда возможны выраженные побочные эффекты.
В Институте органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН разработаны фармакологически активные кремнийсодержащие глицерогидрогели [5, 8], проявляющие выраженную противовоспалительную, ранозаживляющую и регенерирующую активность. Они могут быть использованы как самостоятельные лекарственные средства для местного применения, так и в качестве мазевых основ.
В настоящее время кремнийсодержащий глицерогидрогель формального состава Si(C3H7O3)4·6C3H8O3·24H2O (препарат «Силативит») проходит клинические испытания в качестве средства для местного лечения воспалительных стоматологических заболеваний [3]. С целью внедрения данного средства в медицинскую практику был составлен полный пакет нормативно-технической документации на субстанцию и препарат «Силативит», включая Фармакопейную статью предприятия; разработана и валидирована методика количественного определения кремния в геле [9].
Учитывая актуальность использования иммунотропных средств для местного применения, нами было предложено и запатентовано новое лекарственное средство для лечения воспалительных заболеваний полости рта с использованием в качестве активного компонента галавита (0,7 мас. %) и в качестве мазевой основы – субстанции препарата «Силативит» [10]. В эксперименте на лабораторных животных была показана безопасность его применения и высокая фармакологическая активность (противовоспалительная, ранозаживляющая и регенерирующая активность) [7].
Целью настоящей работы являлась разработка методики количественного определения галавита в мази на гидрофильной кремнийсодержащей основе и определение ее валидационных характеристик.
Экспериментальная часть
Содержание галавита в разрабатываемом средстве определяли методом УФ спектроскопии на спектрофотометре фирмы Shimadzu: UV-2401 PС (Япония) в области 400–190 нм. Предварительно готовили калибровочные растворы (водные растворы субстанции галавита), регистрировали их спектры и строили калибровочную кривую (рисунок). Калибровку проводили по полосе поглощения 297 нм, характерной для субстанции галавита.
Калибровочный график зависимости степени абсорбции от концентрации галавита (C) в исследуемом растворе
Методика количественного определения галавита основана на его исчерпывающей водной экстракции из разрабатываемого средства. 2 г (точная навеска) разрабатываемого средства растворяют в 50 мл дистиллированной воды и перемешивают на магнитной мешалке в течение 1 часа. Затем полученную водную суспензию оставляют для осаждения на сутки. После отстаивания 1 мл надосадочного раствора помещают в мерную колбу на 50 мл и доводят объем водой до метки. Концентрацию галавита в надосадочной жидкости определяют из калибровочного графика (рисунок). Содержание галавита в разрабатываемом средстве в процентах (X) вычисляют по формуле:
где М – молярная масса галавита, г/моль; Vмк1 – объем мерной колбы 1, л; Vмк2 – объем мерной колбы 2, л; С – концентрация галавита в водном извлечении, моль/л; Vал – объем аликвоты, л; a – навеска мягкой лекарственной формы, г.
Для валидации методики готовили модельные смеси (№ 1–3), состоящие из субстанции галавита и кремнийсодержащего глицерогидрогеля, содержащие соответственно 80, 100 и 120 % определяемого компонента (аналитическая область определения), по отношению к их содержанию в разрабатываемом средстве, а также «плацебо», не содержащую субстанцию галавита.
Расчет метрологических характеристик и валидационную оценку методики количественного определения галавита проводили на пяти образцах каждой модельной смеси по показателям: специфичность, аналитическая область, линейность, правильность и прецизионность [1, 2, 4, 6, 11].
В табл. 1 приведены данные количественного определения галавита в модельных смесях (№ 1–3). Для каждой модельной смеси было проведено по 5 параллельных определений.
Результаты исследования и их обсуждение
В табл. 2 приведены данные статистической обработки результатов количественного определения галавита в модельных смесях.
Специфичность определяли на примере модельной смеси «плацебо» по методике, описанной выше. Во всех случаях отсутствовала полоса поглощения в области 297 нм, что подтверждает специфичность методики.
Таблица 1
Результаты количественного определения галавита в модельных смесях
|
Модельная смесь, № |
Определяемый компонент, % |
Заданное содержание галавита, мас. % |
Фактическое содержание галавита, мас. % |
|
1 |
80 |
0,56 |
0,55 |
|
0,56 |
|||
|
0,56 |
|||
|
0,56 |
|||
|
0,57 |
|||
|
2 |
100 |
0,70 |
0,68 |
|
0,69 |
|||
|
0,69 |
|||
|
0,71 |
|||
|
0,72 |
|||
|
3 |
120 |
0,84 |
0,82 |
|
0,82 |
|||
|
0,83 |
|||
|
0,85 |
|||
|
0,85 |
Таблица 2
Данные статистической обработки результатов количественного определения галавита в модельных смесях
|
Метрологические характеристики |
Модельная смесь, № |
||
|
1 |
2 |
3 |
|
|
µ (истинное значение измеряемой величины), мас. % |
0,56 |
0,70 |
0,84 |
|
|
0,56 |
0,69 |
0,83 |
|
s2 (дисперсия) |
0,0001 |
0,0001 |
0,0001 |
|
s (стандартное отклонение), мас. % |
0,0071 |
0,0084 |
0,0055 |
|
|
0,0002 |
0,0038 |
0,0025 |
|
|
0,01 |
0,54 |
0,30 |
|
∆х (значение доверительного интервала результата отдельного определения), мас. % |
± 0,02 |
± 0,02 |
± 0,02 |
|
|
± 0,01 |
± 0,01 |
± 0,01 |
|
ε (относительная ошибка результата отдельного определения), % |
3,52 |
3,35 |
1,83 |
|
|
1,57 |
1,49 |
0,81 |
|
tвыч (95 %, 4) вычисленное значение критерия Стьюдента |
0,01 |
0,53 |
1,63 |
(среднее значение выборки), мас. %
(стандартное отклонение среднего результата), мас. %
(относительное стандартное отклонение среднего результата (коэффициент вариации)
(значение доверительного интервала среднего результата определения), мас. %
(относительная ошибка среднего результата определения), %
Установлено, что в пределах аналитической области определения галавита наблюдается линейная зависимость определяемой величины, при этом расчетная величина коэффициента корреляции r отвечает условию |r| ≥ 0,99, и доверительные интервалы лежат в пределах 2 % относительно значения определяемой величины.
Для оценки правильности анализировали модельные смеси № 1–3, содержащие соответственно 80, 100 и 120 % определяемого компонента (галавита). Валидируемая методика может быть признана правильной, поскольку определяемые экспериментально значения лежат внутри доверительных интервалов, соответствующих средним результатам анализа. Рассчитанные значения tвыч. оказались меньше табличного (tтабл = 2,36 при Р = 95 %, f = 8), что позволяет с вероятностью 95 % сделать вывод об отсутствии значимой систематической ошибки.
Прецизионность оценивали на модельных смесях № 1–3 по величине стандартного отклонения результата отдельного определения и относительной ошибки результата отдельного определения. Установлено, что относительная ошибка не превышает 2,28 % от истинного значения измеряемой величины.
Метрологические характеристики методики количественного определения галавита в разрабатываемом средстве приведены в табл. 3.
Выводы
Разработана методика количественного определения галавита в мази на гидрофильной кремнийсодержащей основе методом УФ спектроскопии. Обоснованность методики подтверждена результатами определения таких валидационных характеристик как специфичность, аналитическая область, линейность, правильность и прецизионность. Разработанная методика может быть рекомендована для включения в нормативно-техническую документацию для контроля качества разрабатываемого средства.
Таблица 3
Метрологические характеристики методики количественного определения галавита в разрабатываемом средстве
|
μ |
f |
|
s2 |
s |
Р |
t(P, f) |
∆х |
ε |
|
0,70 |
8 |
0,69 |
0,0001 |
0,0070 |
95 |
2,36 |
0,02 |
2,28 |
Рецензенты:
Петров А.Ю., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармации фармацевтического факультета, ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Екатеринбург;
Левит Г.Л., д.х.н., ведущий научный сотрудник, ФГБУН Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, г. Екатеринбург.
Работа поступила в редакцию 08.11.2013.