Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,087

GENETIC POLYMORPHISMS OF INHERITED THROMBOPHILIA ASSOCIATED WITH THE DEVELOPMENT OF EARLY THROMBOTIC OCCLUSION IN THE AREA OF RECONSTRUCTION IN PATIENTS AFTER RECONSTRUCTIVE SURGERY ON THE ABDOMINAL AORTA AND LOWER LIMB ARTERIES

Lazarenko V.A. 1 Parfenov E.I. 1 Churnosov M.I. 2 Bobrovskaya E.A. 1
1 Kursk State Medical University
2 Federal state Autonomous educational institution of higher professional education «Belgorod state national research university»
Изучена связь между генетическими полиморфизмами наследственных тромбофилий (1691G/A FV, 20210G/A FII, 677 С/T MTHFR, 455 G/A FGB) и риском развития тромбоза зоны реконструкции после реваскуляризирующих операций на брюшной аорте и артериях нижних конечностей. В исследование вошли 119 мужчин, разделенные на 3 группы (оперированные с тромбозом зоны реконструкции, без тромбоза зоны реконструкции и контрольная группа). В исследуемые выборки включались индивиды русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья РФ и не имеющие родства между собой. Установлен факт значимого вклада сочетания генетических вариантов 677 T MTHFR, 455 A FGB в повышение риска развития тромботической окклюзии зоны реконструкции при операциях на брюшной аорте и артериях нижних конечностей в первые 6 месяцев послеоперационного периода (OR = 4.0).
The study was aimed at assessing the relationship between genetic polymorphisms of hereditary thrombophilia (1691G / A FV, 20210G / A FII, 677 C / T MTHFR, 455 G / A FGB) and the risk of thrombosis of the reconstructed zone after the revascularization operations in the abdominal aorta and lower limb arteries. The study included 119 males divided into 3 groups ( patients after revascularization operations in the abdominal aorta and lower limb arteries complicated by the thrombosis of the reconstruction zone, patients after revascularization operations in the abdominal aorta and lower limb arteries without thrombosis of the reconstruction zone and control group). Only individuals of Russian nationality were included in the study sample, all are the natives of the Central Chernozem Russia and have no relationship with each other. It was determined that there is a fact of the significant contribution of the combination of genetic variants of 677 T MTHFR, 455 A FGB at increased risk of thrombotic occlusion of the reconstructed area after operations on the abdominal aorta and the lower limb arteries in the first 6 months of the postoperative period (OR = 4.0).
genes
hereditary thrombophilia
surgery
thrombosis
1. Belov Ju.V., Stepanenko A.B. Povtornye rekonstruktivnye operacii na aorte i magistral’nyh arterijah. M.: OOO «Medicinskoe informacionnoe agentstvo». 2009. 176 р.
2. Poljancev A.A. Prognozirovanie rannih trombogemorragicheskih oslozhnenij posle rekonstruktivnyh operacij na magistral’nyh arterijah nizhnih konechnostej / Poljancev A.A., Mozgovoj P.V., Frolov D.V., Munasar A.D., Shherbakov M.V. // Vestnik Volgogradskogo gosudarstvennogo medicinskogo universiteta. 2004. no. 11. рр. 68–72.
3. Mihajlov I.P. Hirurgicheskoe lechenie bol’nyh s arrozionnymi krovotechenijami posle rekonstruktivnyh operacij na aorte i arterijah nizhnih konechnostej / Mihajlov I.P., Lemenev V.L. // Hirurgija. Zhurnal im. N.I. Pirogova. 2004. no. 9. рр. 10–13.
4. Sultanjan T.L. Oslozhnenija posle rekonstruktivnyh operacij na magistral’nyh arterijah nizhnih konechnostej i metody ih korrekcii / Sultanjan T.L., Sarkisjan A.S., Hachatrjan  A.M. // Angiologija i sosudistaja hirurgija. 2013. T. 19, no. 1. рр. 124–128.
5. Favorov A.V. A Gibbs sampler for identification of symmetrically structured, spaced DNA motifs with improved estimation of the signal length / Favorov A.V., Gelfand M.S., Gerasimova A.V., Ravcheev D.A., Mironov A.A., Makeev V.J. // Bioinformatics. 2005. Vol. 21. рр. 2240–2245.
6. Finsterer J. Risk-factor profile in severe, generalized, obliterating vascular disease / Finsterer J., Dossenbach-Glaninger A., Krugluger W., Stöllberger C., Hopmeier P. // South. Med. J., 2004. Vol. 97(1). рр. 87–92.
7. Hoppe B. Gene polymorphisms implicated in influencing susceptibility to venous and arterial thromboembolism: frequency distribution in a healthy German population / Hoppe B., Tolou F., Dörner T., Kiesewetter H., Salama A. // Thromb. Haemost., 2006. Vol. 96(4). рр. 465–470.
8. Sheweita S.A. Role of genetic changes in the progression of cardiovascular diseases / Sheweita S.A., Baghdadi H., Allam A.R. // Int. J. Biomed. Sci., 2011. Vol. 7(4). рр. 238–248.

Количество реконструктивных операций на брюшной аорте и артериях нижних конечностей продолжает находиться на стабильно высоком уровне. Несмотря на достижения современной хирургической техники и фармакотерапии, с каждым годом увеличивается количество повторных реконструктивных оперативных вмешательств. Повторные реконструктивные операции относятся к числу наиболее технически сложных оперативных вмешательств и сопровождаются высокой летальностью и инвалидизацией пациентов [1]. Одной из наиболее частых причин повторных реконструктивных операций являются тромбозы и окклюзии шунтов и зон реконструкций [4]. По данным литературы, частота тромбозов после операций на аорто-бедренном сегменте достигает 9,3 %, а бедренно-подколенно-тибиальном до 12 % [2]. Среди причин ранних послеоперационных тромбозов, возникших в первые 6 месяцев после операции, выделяют хирургические погрешности, несостоятельность дистального русла [3]. Значительную роль в развитии тромботических окклюзий играют нарушения свертывающей системы крови [7]. Увеличение числа облитерирующих сосудистых заболеваний может быть связано с комбинацией различных факторов генетического риска атеросклероза [6; 8]. Этот вопрос до сих пор остается актуальным, так как недостаточно изучен патогенез тромбозов сосудистых реконструкций.

Цель и задачи: изучить влияние генетических полиморфизмов наследственных тромбофилий на риск развития раннего тромбоза у больных после реконструктивных операций на брюшной аорте и артериях нижних конечностей.

Материалы и методы исследования

Исследовано 119 пациентов. Все пациенты мужчины, этнически коренные жители центрального черноземного района РФ. Исследуемая выборка была разделена на 3 группы. В первую группу включены больные, у которых в первые 6 месяцев после реконструктивной операции на брюшной аорте и артериях нижних конечностей развилась тромботическая окклюзия зоны реконструкции. Во вторую группу вошли больные, перенесшие реконструктивную операцию на брюшной аорте и артериях нижних конечностей, без признаков тромбоза в зоне реконструкции по истечении 6 мес. Третью (контрольную) группу, составили мужчины без признаков хронических облитерирующих заболеваний аорты и артерий нижних конечностей. Все больные из первой и второй групп в послеоперационном периоде получали двойную дезагрегантную терапию (ацетилсалициловая кислота + клопидогрель), в послеоперационном периоде не было ни геморрагических, ни инфекционных осложнений. Выполнялась инструментальная (ультразвуковое дуплексное сканирование артерий, ангиография) и лабораторная диагностика (клинический анализ крови, биохимический анализ крови с липидным профилем, коагулограмма, исследование крови на маркеры тромбофилии: Д-димер, гомоцистеин, антитромбин III, тест на агрегацию тромбоцитов). Исследование полиморфизма проводили с помощью методов полимеразной цепной реакции с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров с последующим анализом полиморфизма генов по локусам 1691G/A FV, 20210G/A FII, 677 С/T MTHFR, 455 G/A FGB методом TaqMan зондов с помощью real-time ПЦР. Статистическую обработку данных проводили с помощью программы Statistiсa 6,0.

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты генотипирования данных индивидов по локусам 1691G/A FV, 20210G/A FII, 677 С/T MTHFR, 455 G/A FGB представлены в таблице.

Исследование распределения генотипов изучаемых полиморфных маркеров наследственных тромбофилий показало, что для всех рассмотренных генетических полиморфизмов эмпирическое распределение генотипов соответствует теоретически ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (p > 0,05).

Уровень аллельного разнообразия по изученным локусам варьировался от Н0 = 0,02 (для локуса 1691G/A FV) до Н0 = 0,46 (для локуса 20210G/A FII) среди больных с ранней тромботической окклюзией зоны реконструкции после реконструктивной операции на брюшной аорте и артериях нижних конечностей. Среди больных, перенесших реконструктивную операцию, без развития ранней тромботической окклюзии в зоне реконструкции, этот показатель составил Н0 = 0,48 (для локусов 677 С/T MTHFR и 455 G/A FGB), а в контрольной группе он был равен Н0 = 0,34 (для локусов 677 С/T MTHFR и 455 G/A FGB).

При сравнительном анализе распределения частот аллелей и генотипов наследственных тромбофилий 1691G/A FV, 20210G/A FII, 677 С/T MTHFR, 455 G/A FGB в группе больных с ранней тромботической окклюзией зоны реконструкции после реконструктивной операции на брюшной аорте и артериях нижних конечностей, в группе больных без тромботической окклюзии зоны реконструкции после реконструктивной операции на брюшной аорте и артериях нижних конечностей и в контрольной группе статистически достоверных различий среди вышеперечисленных групп выявлено не было.

Далее мы проанализировали роль комбинаций генетических вариантов исследуемых локусов наследственных тромбофилий в формировании ранней тромботической окклюзии зоны реконструкции после реконструктивной операции на брюшной аорте и артериях нижних конечностей. Исследование проведено с помощью программного обеспечения АРSampler [http://sources.redhat.com/cygwin/], использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику [5].

Следует отметить, что в формировании значимой комбинации генетических вариантов, отличающих группу больных с ранней тромботической окклюзией зоны реконструкции после реконструктивной операции на брюшной аорте и артериях нижних конечностей от контрольной группы участвуют два рассмотренных генетических полиморфизма: 677 С/T MTHFR, 455 G/A FGB.

Установлена ассоциация сочетания генетических вариантов аллеля 677 T MTHFR и аллеля 455G A FGB с формированием ранней тромботической окклюзии в зоне реконструкции. У 27,27 % больных с ранней тромботической окклюзией зоны реконструкции имеется данное сочетание генетических вариантов, тогда как в контрольной группе оно выявлено у 8,57 % (p = 0,03), а среди больных, перенесших реконструктивную операцию на брюшной аорте и артериях нижних конечностей без развития ранней тромботической окклюзии в зоне реконструкции, данное сочетание генетических вариантов выявлено у 12,50 % (рисунок). Данная комбинация полиморфных вариантов генов наследственных тромбофилий является фактором риска развития ранней тромботической окклюзии у больных, перенесших реконструктивную операцию на брюшной аорте и артериях нижних конечностей (ОR = 4,0; 95 % CI 1,03–15,53).

Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров генов 1691G/A FV, 677 C/T MTNFR, 20210 G/A FII, 455 G/A FGB в исследуемых группах

Полиморфизм

Аллели, генотипы

Пациенты с тромбозом зоны реконструкции (n = 44)

Пациенты без тромбоза зоны реконструкции (n = 40)

Контрольная группа

(n = 35)

ОR (95 % СI), χ2, p

ОR (95 % СI), χ2, p

ni

 %

ni

 %

ni

 %

1691G/A FV

1691G

87

98,86

80

100

70

100

0,001 (0,55-21,6)

χ2 = 0,01; p = 1,01

-

χ2 = 0,01; p = 1,01

1691A

1

1,14

0

0

0

0

Infi (0,053-0,054)

χ2 = 0,01; p = 1,01

-

χ2 = 0,01; p = 1,01

1691 GG

43

97,73

40

100

35

100

0,01 (0,5-21,89)

χ2 = 0,01; p = 1,01

-

χ2 = 0,01; p = 1,01

1691 GA

1

2,27

0

0

0

0

Infi (0,046-0,047)

χ2 = 0,01; p = 1,01

-

χ2 = 0,01; p = 1,01

1691 AA

0

0

0

-

0

0

-

-

677 C/T MTHFR

677 T

27

30,68

25

31,25

14

20,0

1,77(0,79-3,97)

χ2 = 1,79; p = 1,18

1,82 (0,81-4,14)

χ2 = 1,91; p = 0,17

677 C

61

69,32

55

68,75

56

80,0

0,56(0,25-1,26)

χ2 = 1,79; p = 1,18

0,55 (0,24-1,24)

χ2 = 1,91; p = 0,17

677 TT

4

9,10

3

7,5

1

2,86

3,40(0,33-82,41)

χ2 = 0,44; p = 0,5

2,76 (0,23-71,22)

χ2 = 0,14; p = 0,71

677 CT

19

43,18

19

47,5

12

34,28

1,45(0,53-4,05)

χ2 = 0,33; p = 0,52

1,73 (0,62-4,92)

χ2 = 0,85; p = 0,36

677 CC

21

47,72

18

45,0

22

62,86

0,54 (0,19-1,47)

χ2 = 1,24; p = 0,26

0,48 (1,17-1,35)

χ2 = 1,73; p = 0,19

20210 G/A FII

20210 G

86

97,73

80

100

70

100

0,001 (0,55-21,6)

χ2 = 0,01; p = 1,01

-

χ2 = 0,01;p = 1,01

20210 A

2

2,27

0

0

0

0

Infi (0,053-0,054)

χ2 = 0,01; p = 1,01

-

χ2 = 0,01; p = 1,01

20210 GG

42

95,45

40

100

35

100

0,01 (0,55-5,23)

χ2 = 0,01; p = 1,01

-

χ2 = 0,01; p = 1,01

20210 GA

2

4,55

0

0

0

0

Infi (0,046-0,047)

χ2 = 0,31; p = 0,58

-

χ2 = 0,01; p = 1,01

20210 AA

0

-

0

-

0

-

-

-

455 G/A FGB

455 G

66

75,0

23

73,08

56

80,0

0,75 (0,33-1,71)

χ2 = 0,31; p = 0,58

0,62 (0,27-1,41)

χ2 = 1,10; p = 0,29

455 A

22

25,0

57

26,92

14

20,0

1,33 (0,58-3,03)

χ2 = 0,31; p = 0,58

1,62 (0,71-3,70)

χ2 = 1,10; p = 0,29

455 GG

24

54,55

19

47,50

22

62,86

1,71 (0,26-1,93)

χ2 = 0,27; p = 0,61

0,54 (0,19-1,49)

χ2 = 1,21; p = 0,27

455 GA

18

40,90

19

47,50

12

34,28

1,32 (0,48-3,69)

χ2 = 0,13; p = 0,71

1,73 (0,62-4,91)

χ2 = 0,85; p = 0,36

455 AA

2

4,55

2

5,0

1

2,86

1,61 (0,11-46,69)

χ2 = 0,01; p = 1,01

1,73 (0,12-50,25)

χ2 = 0,01; p = 1,01

laz1.wmf

Частота сочетания генетических вариантов 677 T MTHFR и 455 A FGB среди исследуемых групп

Выводы

Выявлен значимый вклад комбинации полиморфных вариантов наследственных тромбофилий (677 С/T MTHFR, 455 G/A FGB) в формирование ранней тромботической окклюзии зоны реконструкции при операциях на брюшной аорте и артериях нижних конечностей. Сочетание генетических вариантов 677 T MTHFR, 455 A FGB значительно повышает (OR = 4,0) риск развития ранней тромботической окклюзии зоны реконструкции при операциях на брюшной аорте и артериях нижних конечностей.

Рецензенты:

Сорокина И.Н., д.б.н., доцент, доцент кафедры медико-биологических дисциплин, ФГАОУ ВПО «Белгородский национальный исследовательский университет», медицинский институт, факультет лечебного дела и педиатрии, г. Белгород;

Полоников А.В., д.м.н., профессор, профессор кафедры биологии, медицинской генетики и экологии, ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Курск.