Актуальность. В настоящее время широко применяется вакцинопрофилактика различных инфекционных заболеваний собак. Известно, что не всегда ветврачи получают нужный результат -стойкий иммунный ответ на введение вакцины. Часто вакцинируются животные с иммунодефицитами на фоне латентнопротекающих инфекционных заболеваний - в результате наступают по ствакцинальные осложнения.
Проблема профилактики хламидиоза у собак очень важна, так как в современных ассоциированных вакцинах для собак (эурикан, гексадог, нобивак, мультикан, биовак, дюрамун) штаммов хламидий нет. В результате проведенного эпизо-отологического анализа по г. Перми выявлено, что у каждой третей собаки, исследованной на хламидиоз методом иммуноферментного анализа или полимеразной цепной реакцией, приходит положительной ответ. С особой остротой эта проблема касается животных, участвующих в племенном разведении. Поэтому свой выбор мы остановили на поливалентной инактивированной вакцине «Хламикон». Ветеринарные врачи часто в практике во время иммунизации одномоментно с вакциной используют иммуномодуляторы, чтобы обеспечить более высокий уровень защиты против инфекций.
10% анандин инъекционный (1,2;5,6-ди-о-изопропиреден-N,N-диметил-аминопропил-диме-тиламинопропилкарбокридон) при введении в организм индуцирует образование эндогенных цитокинов: интерферона, ряда интерлейкинов, TNF-L, активирует клеточный и гуморальный иммунный ответ (Th1/Th2), усиливает функциональную активность Т- и В-лимфоцитов, нейтрофильный гранулоцитоз, активирует фагоцитоз.
Цель. Разработать оптимальную схему совместного использования анандина и вакцины «Хламикон» во время вакцинаторного процесса.
Свой выбор мы остановили на этом препарате, так как он широко применяется в ветеринарной практике, относительно недорогой, хорошо переносится животными.
Материалы и методы. Исследования проходили in vitro и in vivo. Эксперименты в системе in vivo выполнены на белых беспородных крысах-самцах массой 180-200 грамм и собаках в возрасте от 1,5 до 7 лет. В опытах использовались клинически здоровые животные. Эксперимент проводили с добровольного согласия владельцев животных.
Вакцина «Хламикон» содержит штаммы Chlamydia psittaci K-1 и Chlamydia psittaci C-1, представляет собой слегка опалесцирующую желто-розовую жидкость с серовато-белым рыхлым осадком, легко разбивающимся при встряхивании в гомогенную взвесь. Вакцина выпускается в стеклянных ампулах по 1 мл. Производство «Вет-ЗвероЦентра» (Россия).
Экспериментальные животные содержались в стандартных условиях вивария и питомника собаководства. Все эксперименты выполнены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.
Животные (белые крысы, собаки) были разбиты на 4 группы: 1-я - контрольная, 2-я - иммунизация «Хламиконом», 3-я - иммунизация «Хламиконом» вместе с анандином, 4-я - 10% раствор анандина за 14 дней до иммунизации «Хламиконом» животным вводили внутримышечно в область бедра.
В течение вакцинального процесса за экспериментальными животными (собаками) проводилось динамическое клиническое наблюдение с явкой к ветеринарному врачу два раза в неделю.
Крысы также наблюдались ежедневно в условиях экспериментально-биологической клиники (вивария). Ежедневное наблюдение за животными включало в себя регистрацию поведения, внешнего вида животных, физиологических функций.
В каждой группе до начала эксперимента (исходный фон) и через 14 дней после иммунизации забирали плазму крови.
Показатели фагоцитоза оценивали методом В. Н. Каплина в качестве объектов фагоцитоза были взяты формалинизированные эритроциты бара на (фагоцитарное число, процент фагоцитоза, фагоцитарный индекс).
Входе эксперимента изучали гематологические параметры (число эритроцитов, концентрацию гемоглобина) и лейкоформулу крови. Забор крови у крыс осуществляли из хвостовой вены.
У собак для оценки показателей фагоцитоза, гематологических параметров получали кровь из вены предплечья до начала эксперимента; во 2-ой, 3-ей и 4-ой группах через 30 мин. после иммунизации и спустя 14 дней.
Крыс выводили из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Во время проведения аутопсии забирали органы (селезенка, костный мозг, тимус, пейеровы бляшки, лимфатические узлы) для проведения гистологического исследования.
Материал для гистологических исследований фиксировали в 10 %-ном нейтральном формалине. Гистологические препараты готовили по стандартной методике с заливкой в парафине. Срезы толщиной 3 мкм получали на ротационном микротоме, окрашивали гемотоксилином и эозином, микроскопировали в проходящем свете светового микроскопа при увеличении 150 и 600.
В опытах in vitro определяли влияние анандина на фагоцитарную активность лейкоцитов в разных дозировках для выбора оптимальной рабочей дозы. В опытах использовали 4 разведения препаратов 10:1, рабочая доза, 1:10, 1:100 и контроль.
Результаты экспериментов подвергали статистической обработке с применением программного пакета Biostat. Характеризуя выборку, определяли среднее арифметическое и стандартное отклонение, сравнение выборок между собой проводили при помощи критериев Манна-Уитни и Уилкоксона.
Результаты исследования.
Результаты исследования эффективности вакцинации у крыс. В течение эксперимента не отмечено случаев гибели животных. Поведение, аппетит, физиологические функции у животных опытных групп не отличались от таковых у жи вотных группы контроля.
При анализе лабораторных показателей выявлены изменения в лейкоформуле крови, отмечено абсолютное увеличение лимфоцитов у экспериментальных животных группы 2 в 1,12 раз по сравнению с исходным фоном (P>0,05) и в 1,26 по сравнению с контролем (P>0,05). У животных группы 3 абсолютное количество лимфоцитов периферической крови увеличилось в 1,9 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 1,58 по сравнению с контролем (P<0,05). У животных 4 группы абсолютное количество лимфоцитов периферической крови возросло в 1,6 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 1,69 по сравнению с контролем (P<0,05).
Фагоцитарная активность лейкоцитов у крыс опытной группы 3 увеличилась в 1,28 раз по сравнению с исходным фоном и 1,4 раза по сравнению с контролем. Фагоцитарная активность лейкоцитов у опытной группы 4 увеличилось в 2,14 раз по сравнению с исходным фоном и в 1,48 раз по сравнению с контролем. У опытной группы 2 значимых изменений фагоцитарной активности лейкоцитов не отмечено.
При проведении гистологического исследования установлено, что у опытной группы 2 в органах иммуногенеза выявлено увеличение количества макрофагов и плазматических клеток по сравнению с контролем (макрофагально-плазмоцитарная реакция). Отмечался отек стромы. Наблюдалось появление в большом количестве бластных клеток. В селезенке наблюдалось увеличение удельного объема белой пульпы, увеличение светлых центров в фолликулах.
У животных опытной группы 3 также наблюдалось увеличение количества макрофагов, плазмоцитов и бластных клеток. При этом у животных опытной группы 4 макрофагально-плазмоцитарная реакция в органах иммугенеза была в значи тельной степени более выражена по сравнению с животными других опытных групп.
Таким образом, при использовании анандина во время вакцинации «Хламиконом» отмечено изменение неспецифической защиты иммунитета в периферической системе крови (увеличение абсолютного количества лимфоцитов и фагоцитарной активности лейкоцитов) и выраженная активность местной реакции (макрофагально-плазмацитарная реакция в органах иммуногенеза).
Результаты исследования эффективности вакцинации у собак.
При анализе лейкоформулы крови у собак опытной группы 2 отмечается изменение абсолютного количества лимфоцитов периферической крови в 1,18 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 1,22 по сравнению с контролем (P<0,05). При этом абсолютное количество лимфоцитов у животных опытной группы 3 увеличилось в 1,8 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 2,05 по сравнению с контролем (P<0,05). У животных опытной группы 4 абсолютное количество лимфоцитов увеличилось в 1,59 раз по сравнению с исходным фоном (P<0,05) и в 1,63 по сравнению с контролем (P<0,05).
Количество эритроцитов и гемоглобина у обследуемых групп находились в пределах нормы. Также не выявлено отличий по данным показателям между группами.
У опытной группы 2 значимых изменений фагоцитарной активности лейкоцитов не отмечено.
Фагоцитарная активность лейкоцитов у опытной группы 3 увеличилась в 1,4 раза по сравнению с исходным фоном и 1,3 раза по сравнению с контролем. В опытной группе 4 фагоцитарная активность лейкоцитов увеличилась в 2,12 раз по срав нению с исходным фоном и в 2,6 раз по сравнению с контролем.
В результате проведенных исследований с анандином было установлено: препарат в рекомендуемой производителем дозе значительно увеличивает фагоцитарную активность лейкоцитов у собак; при снижении дозы в 10 и 100 соответственно фагоцитарная активность лейкоцитов снижается, но все же выше, чем в группе контроля. Кроме стимулирующего действия на фагоцитоз 10% раствор анандина также усиливает функцию поглощения.
Следовательно, как при проведении эксперимента, так и в клинических наблюдениях было установлено, что при использовании анандина во время вакцинации «Хламиконом» происходит запуск не специфического ответа в периферической системе крови (увеличение абсолютного количества лимфоцитов и фагоцитарной активности лейкоцитов).
Таким образом, в экспериментальных исследованиях in vitro установлено, что введение анандина животным стимулирует фагоцитарную активность лейкоцитов. При использовании анандина необходимо очень внимательно относиться к расчету доз, так как неправильная дозировка препарата может привести к угнетению фагоцитарного звена иммунитета у животных.
В эксперименте in vivo эффективность применения анандина значительно возрастает при введении иммуномодулятора за 14 дней до вакцинации.
Библиографическая ссылка
Косарева П.В., Стяжкина Н.В., Кумаланина И.В., Самоделкин Е.И. ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА АНАНДИН НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ХЛАМИДИОЗА СОБАК ВАКЦИНОЙ «ХЛАМИКОН» // Фундаментальные исследования. – 2009. – № 7. – С. 14-16;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=2100 (дата обращения: 25.04.2024).