Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Храмова И.А. 1 Рачкова Е.В. 1

---

1 ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет», Владивосток

Исследована секреция ИЛ-8 моноцитами крови, состояние стабильности лизосомных мембран и секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у 10 здоровых фертильных женщин, 18 женщин с трубно-перитонеальным бесплодием и 8 женщин с бесплодием неясного генеза. Выявлено, что при трубно-перитонеальном бесплодии у женщин происходит усиление секреции ИЛ-8 моноцитами крови, лабилизация лизосомных мембран моноцитов/макрофагов, повышение секреции и незначительное снижение синтеза лизоцима этими клетками. При бесплодии неясного генеза имеет место стабилизация лизосомных мембран, снижение секреции и синтеза лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами. Секреция ИЛ-8 моноцитами крови у женщин с бесплодием неясного генеза практически не отличается от уровня здоровых фертильных женщин.

Статья в формате PDF

270 KB

лизоцим

интерлейкин-8

бесплодие

1. Бехало В.А., Сысолятина Е.В., Нагурская Е.В. Регуляция врожденного иммунного ответа в очаге хронического воспаления // Иммунология. – 2009. – Т.30, №3. – С. 184–189.

2. Мотавкина Н.С., Шаронов А.С., Ковалев Б.М. Микрометоды в иммунологии. – Владивосток: Изд-во Дальневосточного университета, 1987. – 182 с.

3. Назаренко Т.А., Дуринян Э.Р., Перминова С.Г. Современные подходы к диагностике и лечению бесплодия у женщин // Гинекол. – 2004. – Т.6, №6. – С. 323–325.

4. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение прикладных программ «Statistica». – М.: Изд-во Медиа сфера, 2002. – 305 с.

5. Федорова Т.А. Бесплодие неясного генеза: некоторые аспекты диагностики и лечения // Гинекология. – 2003. – Т.5, №3. – С. 98–100.

6. Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы: развитие, активация, эффекторные функции // RJI. – 1999. – Vol. 4, suppl. 1. – С. 9–15.

7. Чередеев А.Н. Количественная и функциональная оценка Т и В систем иммунитета у человека // Общие вопросы патологии. Итоги науки и техники. – М.: ВИНИТИ, 1976. – Т.4. – С. 124–160.

8. Шаронов А.С. Оценка изменений стабильности лизосомных мембран мононуклеарных фагоцитов как метод аллергоиммунодиагностики и скрининга мембранотропных и радиопротективных препаратов: метод. рекомендации МЗ СССР. – М., 1989. – 14 с.

9. Шаронов А.С. Фагоциты, лизосомы, мембраны – Владивосток: Дальнаука, 2007. – 128 с.

10. Швыдченко И.Н., Быковская Е.Ю, Роменская В.А. Влияние глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП) на продукцию интерлейкина-8 нейтрофильными гранулоцитами при патологии в эксперименте in vitro. // Рос. иммунол. журн. – 2009. – Т. 3 (12), №3–4. – С. 288–292.

Одной из важнейших проблем нарушения репродуктивного здоровья женщины является бесплодие различного генеза. Наиболее распространенной формой этой патологии считается трубно-перитонеальное бесплодие (50-60 %). В последние годы возросло число больных с бесплодием неясного генеза (5-10 %) [3]. В основе трубно-перитонельного бесплодия, как правило, лежит хроническое воспаление матки и придатков матки, при котором макрофаги играют существенную роль [1, 6]. Бесплодие неясного генеза развивается на фоне клинического благополучия при отсутствии заметных отклонений функциональных и лабораторных показателей, хотя не исключается латентное течение инфекции [5].

Активация клеток системы макрофагов - важный процесс их включения в биологические реакции организма - воспаление, иммунный ответ, процессы регенерации. При активации макрофагов возникает усиление синтетических, секреторных процессов в клетках, в частности, происходит повышение выхода лизосомных ферментов из клеток, усиление выработки интерликина-8, уровень которого в крови заметно повышается [8, 9, 10]. Секреция лизосомных ферментов сопряжена с состоянием стабильности лизосомных мембран клеток: при лабилизации лизосомных мембран происходит повышение выхода ферментов, при стабилизации - снижение [7].

Цель исследования - изучить связь между состоянием стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, уровнем синтеза и секреции лизоцима этими клетками с процессом их активации при трубно-перитонеальном бесплодии и бесплодии неясного генеза.

Материал и методы исследования

Исследование проведено у 18 женщин с трубно-перитонеальным бесплодием и 8 женщин с бесплодием неясного генеза. Больные находились на лечении в гинекологическом отделении городской больницы № 1 г. Владивостока. Диагноз ставился на основании клинико-лабораторных и инструментальных методов исследования с обязательным использованием лапароскопии. Контрольную группу составили 10 здоровых фертильных женщин, обратившихся к гинекологу за консультацией. Возраст женщин колебался от 25 до 36 лет (30,5 ± 2,5 года). Все исследования проводились с учетом информированного согласия женщин.

Выделение моноцитов крови проводилось на градиенте плотности фиколл-верографина центрифугированием крови в течение 30 минут при 400 G с последующим отсасыванием микропипеткой кольца градиента [7]. Клетки прикреплялись к поверхности стекла в течение 60 минут при температуре 37 °С.

Перитонеальные макрофаги получали из суспензии, взятой методом пункций заднего влагалищного свода, так же выделяли прикреплением клеток к поверхности стекла.

Концентрацию клеток считали в камере Горяева и доводили стерильным физиологическим раствором до 6·106 кл/мл. Определение стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с расчетом показателя стабильности (ПСЛМ) проводили методом культивирования выделенных клеток в среде 199 с добавлением 0,5 % стерильного L-глутамина и 2,5 % смешанной человеческой сыворотки, прогретой в течение 30 мин при 56 °С в течение 12-15 часов при 37 °С. Микрометодом [2] проводили определение секретированного лизоцима (Lсекр), а после 4-6-кратного замораживания-оттаивания культивируемых клеток - общего лизоцима (Lобщ - секретированный плюс внутриклеточный). На основании полученных результатов секретированного и общего лизоцима высчитывали ПСЛМ по формуле: ПСЛМ = Lсекр/Lобщ·100 % [8]. По результатам оценки разницы (Lобщ) после и до культивирования определяли количество синтезированного лизоцима (Lсинт).

Проведенные ранее нами исследования выявили выраженные колебания ПСЛМ в зависимости от фазы менструального цикла. Наибольший подъем показателя стабильности лизосомных мембран наблюдался в день предполагаемой овуляции с последующим снижением до оптимального значения (53-58 %) на 19-21 день цикла. Поэтому обследование женщин проводилось во вторую фазу менструального цикла.

Определение интерлейкина - 8 в супернатанте культивированных клеток (оценивалась секреция интерлейкина - 8 моноцитами крови) проводилось методом сендвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реактивов фирмы «R&D Diagnostics Inc.» (США).

Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием пакета программ «Statistica 6» с применением методов вариационной статистики и критерия Манна-Уитни для оценки статистически значимых различий. Различие считалось достоверным при р < 0,05.

Результаты исследований и их обсуждение

В результате проведенного исследования было выявлено, что у здоровых фертильных женщин уровень секреции IL-8 моноцитов крови колеблется в пределах от 80 до 130 пг/мл/10⁶кл и в среднем составляет 118 ± 25 пг/мл/10⁶кл. У женщин с трубно-перитонельным бесплодием происходит значительное возрастание уровня секреции IL-8 по сравнению со здоровыми фертильными женщинами (p < 0,01) и составляет 1130 ± 112 пг/мл/10⁶мл, а при бесплодии неясного генеза уровень IL-8 (128 ± 30 пг/мл/10⁶кл) незначительно превышает этот показатель здоровых фертильных женщин (p > 0,05), что соответствует различной степени эндогенной активации клеток-продуцентов интерлейкина, в частности моноцитов.

При этом состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их секреторно-синтетическая активность при разном уровне секреции IL-8 моноцитами крови имеет различие у здоровых фертильных женщин, женщин с трубно-перитонеальным бесплодием и бесплодием неясного генеза. В табл. 1 представлены результаты исследования ПСЛМ моноцитов/макрофагов фертильных женщин и женщин с бесплодием.

Таблица 1

Показатель стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов фертильных женщин, женщин с трубно-перитонеальным бесплодием
и бесплодием неясного генеза

Примечание (достоверность различий между сравниваемыми группами)

* - p < 0,01; ** - p < 0,001.

Как видно из табл. 1, при трубно-перитонеальном бесплодии наряду с повышением секреции IL-8 происходит выраженное повышение ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по сравнению с показателями здоровых фертильных женщин (p < 0,05 и p < 0,01 соответственно). Установлена прямая сильная корреляционная связь секреции IL-8 и показателя стабильности лизосомных мембран(r < 0,74, p < 0,05). Это свидетельствует о происходящей лабилизации лизосомных мембран этих клеток при данной патологии. У женщин с бесплодием неясного генеза при незначительном повышении IL-8, напротив, наблюдается снижение ПСЛМ моноцитов/макрофагов по отношению к здоровым женщинам, что говорит о стабилизации лизосомных мембран клеток (p < 0,05 и p < 0,01 соответственно).

Секреция лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами, как видно из полученных данных (табл. 2), при бесплодии отличается от уровня секреции здоровых женщин: при трубно-перитонеальном бесплодии она повышена (p < 0,05), при бесплодии неясного генеза, напротив, снижена (p < 0,01).

Таблица 2

Уровень секреции лизоцима (Lсекр) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у фертильных женщин, женщин с трубно-перитонеальным бесплодием и бесплодием неясного генеза

Примечание (достоверность различий между сравниваемыми группами)

* - p1 < 0,01; ** - p2 < 0,001; *** - p3 < 0,001.

Как видно из табл. 3, по сравнению со здоровыми фертильными женщинами при трубно-перитонеальном бесплодии наблюдается снижение синтеза лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами (p < 0,05). Еще большее снижение этого фермента моноцитами/макрофагами отмечается при бесплодии неясного генеза (p < 0,01). Причем снижение синтеза лизоцима перитонеальными макрофагами более выражено.

Таблица 3

Синтез лизоцима (Lсинт) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами
у фертильных женщин, женщин с трубно-перитонеальным бесплодием
и бесплодием неясного генеза

Примечание (достоверность различий между сравниваемыми группами)

* - p < 0,01; ** - p < 0,001.

Описанные результаты свидетельствуют о том, что при трубно-перитонеальном бесплодии происходит лабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с повышением секреции и снижением синтеза лизоцима этими клетками и активацией секреции IL-8 моноцитами крови. При бесплодии неясного генеза незначительное повышение секреции IL-8 сочетается со стабилизацией лизосомных мембран моноцитов/макрофагов, снижением секреции и синтеза лизоцима этими клетками. Повышение секреции IL-8 моноцитами крови и секреции лизоцима моноцитами/макрофагами, тесно связанное с лабилизацией лизосомных мембран, при трубно-перитонеальном бесплодии может быть вызвано длительной активацией клеток системы макрофагов как результа хронического воспалительного процесса [10]. Незначительное повышение секреции IL-8, стабилизация лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, снижение секреции и синтеза лизоцима этими клетками, выявленные при бесплодии неясного генеза, могут отражать скрытые процессы в организме женщины, в том числе латентную инфекцию [5]. Таким образом, выраженные изменения секреторно-синтетической активности клеток макрофагальной системы при бесплодии неясного генеза открывают новые возможности диагностики и перспективы лечения этой патологии.

Рецензенты:

Запорожец Т.С., д.м.н., зам. директора по научной части, в.н.с. НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, г. Владивосток;

Лукьянов П.А., д.х.н., профессор, зав. отделом молекулярной иммунологии УАН «Тихоокеанский институт биоорганической химии» ДВО РАН, г. Владивосток.

Работа поступила в редакцию 30.06.2011.

Библиографическая ссылка