Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

ВЛИЯНИЕ КОБАЛАМИНА НА ГЕМОСТАЗ И ЛИПИДПЕРОКСИДАЦИЮ ПРИ ГИПЕРХОЛЕСТЕРОЛЕМИИ

Тарасов Д.Б. 1 Бышевский А.Ш. 1 Волосатов А.А. 1 Сулкарнаева Г.А. 1 Шаповалов П.Я. 1 Шаповалова Е.М. 1 Шумкова М.В. 1
1 ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Минздрава России
Дополнительное введение высоких доз холестерола с рационом ускоряет непрерывное внутрисосудистое свертывание крови до уровня начальной стадии ДВС крови. Избыток кобаламина в дозах, адекватных малым лечебным, ограничивает эти сдвиги, а в дозах, адекватных высоким – усиливает их, и ограничивает вызываемое введением холестерола снижение толерантности к тромбину. Сдвигам скорости внутрисосудистого свертывания сопутствует ускорение липидпероксидации, снижение антиоксидантного потенциала тромбоцитов и активация фибринолиза. Всё это обусловливает необходимость изучения эффектов разных доз кобаламина на НВСК и ТкТР в клинике, особенно при состояниях с гипертромбинемией. Состояние гемостаза зависит от обеспеченности организма кобаламином, влияющим на тромбоцитопоэз, активность тромбоцитов и плазминовой системы, особенно на фоне атеросклеротических изменений в сердечно-сосудистой системе.
кобаламин
гемостаз
липидпероксидация
гиперхолестеролемия
1. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В.П. Балуда, З.С. Баркаган, Е.Д. Гольдберг и др. – Томск, 1980. – 310 с.
2. Баркаган З.С., Рудницкая Т.А., Колпаков М.А. Нарушение обмена гомоцистеина у больных сахарным диабетом 2 типа / Тромбоз, гемостаз и реология. – 2006. – № 3(27). – С. 20–24
3. Баркаган З.С., Момот А.П. Основные методы лабораторной диагностики нарушений системы гемостаза. – Барнаул, 1998. – С. 83–84.
4.  Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция. – Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство, 1978. – 124 с.
5. Бышевский А.Ш., Мохнатов В. Метод определения антиплазмина в сыворотке крови / Система свертывания крови и фибринолиза. – Киев: Здоровья. – 1969. – С. 220–221.
6. Бышевский А.Ш. Способ определения содержания продуктов деградации фибрина: а.с. № 1659855, регистрация 1.03. 1991, публикация – Бюлл. № 24, 30.06. 1991.
7. Бышевский А.Ш. Способ определения толерантности животных к тромбину / А.Ш. Бышевский, Л.В. Михайлова, Р.Г.Алборов и др. // Патент № 2219546, приоритет от 04.05.2000, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003.
8. Гланц С.А. Медикобиологическая статистика. – М.: Практика, 1998. – 112 с
9. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови. – М.: Медицина. – 1975. – 488 с.
10. Лавров Б.А., Терентьева Е.Л. Содержание лимонной кислоты в крови крыс при длительной даче больших доз витамина Д // Вопр. питания. – 1963. – № 3. – С. 68–72.
11. Момот А.П., Елыкомов В.А., Баркаган З.С. Методика и клиническое значение фенантролинового теста // Клин. лабор. Диагностика. – 1999. – № 4. – С. 17–20.
12. Комплексный анализ липидов крови спектрофотометрическим, флуорометрическим и кинетическим методами / В.Н. Ушкалова, Н.В. Иоанидис, З.М. Деева и др. // Лаб. дело. – 1987. – № 6. – С. 446–460.
13. Шараев П.Н. Витамины и здоровье. – Ижевск: Экспертиза, 2004. – 108 с.
14. Шаповалова Е.А. Механизмы гемостатических сдвигов при отсутствии и избытке витаминов с антиоксидантыми свойствами в рационе питания (экспериментальное исследование): автореф. дис. … д-ра биол. наук. – Челябинск, 2010. – 48 с.
15. Cetin O. Bekpinar, Unlucerci Y.e.a. Hyperhomocysteinemia in chronic renal failure patients: relation to tissue factor and platelet aggregation // Clin. Nephrol. – 2006. – № 65(2). –P. 97–102.
16. Hawk P.W. Practical Physiological Chemistry // Pract. Physiol. Chem. – Phyladelphia. – 1923. – P. 953.
17. Herrmann W., Schorr H., R Obeid e.a. Vitamin B12-status, particularly holotranscobalamin II and methylmalonic acid concentrations, and hyperhomocysteinemia in vegetarians // Am. J. Clin. Nutr. – 2003. – № 78(1). – Р. 131–136.
18. Morel C.F., Lerner J.P., Rosenblatt D.S. Combined methylmalonic aciduria and homocystinuria (cblC): phenotype-genotype correlations and ethnic-specific observations // Mol. Genet. Metab. – 2006. – № 88(4). – P. 315–421.
19. Nadir Y., Hoffman R, Brenner B. Association of HC, vitamin B12, folic acid in patients with a thrombotic event or recurrent fetal loss // Ann. Hematol. – 2007. – № 86 (1). – P. 35–40.

Сведения о связи кобаламин-гемостаз ограничены, но позволяют утверждать:

1. Состояние гемостаза зависит от обеспеченности организма кобаламином (КБ), влияющим на тромбоцитопоэз, активность тромбоцитов и плазминовой системы, особенно на фоне атеросклеротических изменений в сердечно-сосудистой системе [2, 5, 17, 18].

2. Известны заболевания, протекающие с нарушениями гемостаза и дефицитом КБ [15, 19].

3. В эксперименте и клинике выявлено влияние КБ на некоторые про- и антикоагулянты, однако неясно, как влияет дефицит или дополнительное введение КБ на гемостаз в целом [13].

4. Данные о влиянии КБ на интегральные показатели гемостаза (непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и толерантность к тромбину) единичны [14].

Следовательно, необходимо далее изучать связи между обеспеченностью организма КБ и гемостазом, обращая внимание на эффекты его дефицита и избытка при состояниях, протекающих с тромбофилией или кровоточивостью [14].

Цель работы - изучить влияние на НВСК, фибринолиз и толерантность к тромбину (ТкТР), на липидпероксидацию (ЛПО) и антиоксидантный потенциал (АОП) тромбоцитов при содержании животных на рационе с разными дозами КБ на фоне алиментарной гиперхолестеролемии разного уровня.

Материалы и методы исследований

Опыты провели на нелинейных белых крысах (самцы, 180 ± 16 г), получавших сбалансированный пищевой рацион [4, 9, 10, 18]. Выбор крыс связан с тем, что большинство исследований по изучению гемостаза выполняли на этих животных [17]. В атерогенный рацион входил холестерол (ХЛ) по 0,2 г на особь в сут, чему предшествовало введение 6-метилтиоурацила (0,3 мг на особь в сут, 30 дней), который нарушает обмен липидов, снижая функциональную активность щитовидной железы, что ускоряет развитие гиперхолестеролемии и атеросклеротических сдвигов у крыс, устойчивых к избыточному поступлению с пищей ХЛ [4]. Контрольные группы получали рацион питания без 6-метилтиоурацила и холестерола.

 Пробы крови брали в шприц с 3,8%-м раствором цитрата натрия (9:1 по объему) из обнаженной яремной вены у наркотизированного диэтиловым эфиром животного, фиксированного на препаровочном станке. Рану закрывали 2-3 швами (кетгут). В плазме крови устанавливали уровень маркеров НВСК: продуктов деградации фибрина (ПДФ) [6], растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ) [11], D-димеров («D-dimer test", Roche), фф. Р3 и Р4 в плазме по описанию [1]. Концентрацию в плазме осаждаемого тромбином фибриногена (ФГ) определяли спектрофотометрически [5], а Хагеман-зависимый фибринолиз по описанию [3]. Толерантность к тромбину (ТкТР) устанавливали согласно патенту [7]. Липидпероксидацию (ЛПО) в тромбоцитах и их антиоксидантный потенциал (АОП) оценивали, определяя уровень диеновых конъюгат (ДК) и продуктов, реагирующих с тиобарбитуратом (ТБК), период индукции (ПИ) и скорость окисления (СО) устанавливали по описанию [12] на флуориметре «Биан 130». Число n составляло 8-9 во всех группах и этапах.

Статистический анализ проводили с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03 [8], используя вариационную статистику для малых рядов, вычисляя среднюю арифметическую, среднюю ошибку, среднеквадратическое отклонение, доверительный коэффициент Стъюдента и степень вероятности (р). Различия считали достоверными при значениях степени вероятности < 0,05.

Использованы: тромбин, фибриноген (ФГ) бычьей крови, тромбопластин, каолин и буфер Михаэлиса («Технология-стандарт»), набор «D-dimer test» («Roche»), изопропанол, хлорбензол, бутанол и кальция хлорид х.ч., цианокобаламин (ЗАО «Уфавит»), казеин и крахмал маисовый пищевой, масло подсолнечное рафинированное, смесь Осборна-Менделя (все реагенты х.ч.реагенты), ледяная уксусная кислота, концентрированная серная кислота, уксусный ангидрид, абсолютный этанол. Число n во всех группах крыс равно 8.

Результаты исследований и их обсуждение

Вначале изучили эффекты возрастающих доз ХЛ на НВСК, фибринолиз и ТкТР на фоне рациона с кобаламином в соответствии с суточной потребностью (1 мкг/кг - полноценный рацион). Подопытные группы получали ХЛ по 0,2, 0,4 или 0,8 г/кг в сут, пробы брали в конце 6-й и 8-й недели. Из данных таблицы следует, что введение ХЛ (0,2 г/кг) заметно повышает уровень всех плазменных маркеров НВСК (наименьшая доза, использующаяся при оценке влияния ХЛ на атерогенез) к концу 6-й и особенно 8-й недели. Активность фибринолиза не меняется, а ТкТР падает к концу опыта. Увеличение дозы ХЛ в рационе сопровождается пропорциональным ускорением НВСК (выше доза - выше уровни всех маркеров), снижается уровень ФГ, что указывает на его ускоренное потребление, усиливающееся с дозой ХЛ.

Падает и ТкТР, а фибринолиз меняется мало. Уровень липидпероксидов с увеличением дозы ХЛ и длительности введения также повышается, а АОП, напротив, падает.

Изменения НВСК, фибринолиза, ТкТР, ЛПО и АОП при введении возрастающих доз холестерола (0,2, 0,4 или 0,8 г/кг в течение 6 или 8 недель)

Показатели

Полноценный рацион без ХЛ

Тот же рацион с ХЛ (0,2 г, 0,4 и 0,8 в сут) в строках 1, 3 и 3-й через:

6 недель

8 недель

1

2

3

4

Ф, Р3,%

87,9 ± 1,2

101 ± 1,8*

112 ± 1,9*

122 ± 2,3*

101 ± 1,8*

122 ± 1,8*»

127 ± 1,9*»

134 ± 2,2*»

Ф, Р4, с

3,1 ± 0,02

6,2 ± 0,04*

7,9 ± 0,05*

8,8 ± 0,04*

8,2 ± 0,05*»

8,9 ± 0,03*»

10,2 ± 0,06*»

ФГ, г/л

2,1 ± 0,02

1,7 ± 0,08*

1,6 ± 0,04*

1,4 ± 0,09*

1,5 ± 0,08*»

1,3 ± 0,03*»

1,2 ± 0,02*»

ПДФ, мг%

15,1 ± 0,3

19,7 ± 1,1*

23,7 ± 1,4*

29,7 ± 1,8*

23,7 ± 1,4*»

25,7 ± 1,5*»

29,8 ± 1,7*»

РКМФ, мкг/мл

24,1 ± 1,1

31,1 ± 1,2*

35,2 ± 1,4*

41,0 ± 1,8*

31,1 ± 1,2*

38,8 ± 1,3*

40,9 ± 1,6*

D-Д, мкг/мл

0,20 ± 0,008

0,29 ± 0,004*

0,35 ± 0,003*

0,40 ± 0,005*

0,34 ± 0,006*»

0,42 ± 0,007*»

0,54 ± 0,010*»

Фибринолиз, мин

8,5 ± 0,03

9,1 ± 0,09

10,8 ± 0,06

12,3 ± 0,11

9,9 ± 0,09*

11,4 ± 0,11*

13,8 ± 0,09*

1

2

3

4

ТкТР, %

100 ± 2,9

80,3±1,2*

75,7±1,9*

69,3±2,2*

72,3±1,2*»

65,3±1,5*»

54,3±1,8*»

ДК, мг ЛП

0,051 ± 0,002

0,067 ± 0,006*

0,067 ± 0,006*

0,067 ± 0,006*

0,073 ± 0,008*»

0,088 ± 0,006*»

0,093 ± 0,009*»

ТБК, ед,/мг ЛП

0,70 ± 0,03

0,85 ± 0,04*

0,85 ± 0,04*

0,85 ± 0,04*

0,93 ± 0,03*»

1,53 ± 0,04*»

1,70 ± 0,06*»

ПИ, мин/мл

45,7 ± 1,1

34,3 ± 1,1*

34,3 ± 1,1*

34,3 ± 1,1*

27,3 ± 1,0*»

29,8 ± 1,1*»

32,4 ± 1,2*»

СО, мм3/мл/мин

0,75 ± 0,02

0,87 ± 0,05*

0,87 ± 0,05*

0,87 ± 0,05*

1,26 ± 0,08*»

1,44 ± 0,09*»

1,97 ± 0,10*»

Во 2-й группе опытов изучали влияние ХЛ на те же показатели, увеличивая дозу КБ в рационе и длительность опыта (6 и 8 недель крысы получали ХЛ в дозах 0,4; 0,6 или 0,8 г на особь в сут на фоне КБ в дозах, превышающих суточную потребность в 2, 8 или 16 раз).

И в этом случае подтвердилось свойство ХЛ ускорять НВСК - достоверно вырос уровень в плазме маркеров НВСК и выявилось, что введение КБ при всех испытанных дозах ХЛ ограничивает эффекты липида на НВСК и ТкТР, а фибринолиз активируется при 8- и 16-кратной дозе КБ. Скорость ЛПО под влиянием КБ уменьшалась, а АОП возрастал.

Заключая, выделим основные положения:

1. Высокие дозы ХЛ в полноценном рационе ускоряют НВСК до степени, которую можно рассматривать как начальную стадию ДВС крови.

2. Избыток КБ в дозах, адекватных малым лечебным, ограничивает эти сдвиги, а в дозах, адекватных высоким лечебным, усиливает их, и независимо от дозы ограничивает вызываемое введением холестерола снижение толерантности к тромбину.

3. Сдвигам скорости НВСК при гиперхолестеринемии сопутствуют ускорение ЛПО, снижение антиоксидантного потенциала тромбоцитов и активация фибринолиза.

Рецензенты:

Ральченко И.В., д.б.н., профессор кафедры фармацевтической технологии и фармакогнозии с курсом ботаники ГБОУ ВПО ТюмГМА Минздравсоцразвития России, г. Тюмен№

Цейликман В.Э., д.б.н., профессор, зав. кафедрой биохимии ГБОУ ВПО «Челябинская медицинская академия» Минздравсоцразвития России, г. Челябинск.

Работа поступила в редакцию 12.12.2012.


Библиографическая ссылка

Тарасов Д.Б., Бышевский А.Ш., Волосатов А.А., Сулкарнаева Г.А., Шаповалов П.Я., Шаповалова Е.М., Шумкова М.В. ВЛИЯНИЕ КОБАЛАМИНА НА ГЕМОСТАЗ И ЛИПИДПЕРОКСИДАЦИЮ ПРИ ГИПЕРХОЛЕСТЕРОЛЕМИИ // Фундаментальные исследования. – 2012. – № 12-2. – С. 369-372;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=30899 (дата обращения: 21.01.2020).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074