Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОСТИ НОВОГО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ВЕЩЕСТВА С НЕЙРОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Na-CPAH

Макарова Е.А. 1 Сидуллина С.А. 1 Семина И.И. 1 Тарасова Р.И. 2 Мустафин Р.И. 1
1 ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет»
2 ГБОУ ВПО «Казанский государственный технологический университет»
В настоящей работе представлены разработанные методики определения доброкачественности нового биологически активного вещества (БАВ) натриевой соли ацетилгидразино-4-хлорфенилфосфиновой кислоты (Na-CPAH), обладающего нейротропной активностью: «прозрачность раствора», «цветность раствора», «рН», «посторонние примеси», «потеря в массе при высушивании», «хлориды», «сульфаты», «сульфатная зола и тяжелые металлы». Представленные методики являются необходимыми для фармацевтического анализа и обязательными в анализе доброкачественности соединения при определении содержания посторонних примесей в лекарственных препаратах. Предложена методика идентификации посторонних примесей методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей – этанол:хлороформ:аммиака раствор концентрированный 25 % (80:20:5) восходящим методом. Результаты испытания считаются достоверными, если на хроматограмме в УФ-свете при 254 нм четко видно одно пятно с Rf = 0,58 и возможно наличие пятна по размеру и интенсивности поглощения, не превышающее пятно СОВС. Подобранные оптимальные условия хроматографирования БАВ Na-CPAH способствуют высокочувствительному определению посторонних примесей в субстанции.
нейротропные препараты
гидразиды фосфорилированных карбоновых кислот
Na-CPAH
доброкачественность
тонкослойная хроматография
фармацевтический анализ
1. Буряк В. П. Определение содержания примесей в лекарственных веществах методом тонкослойной хроматографии // Реализация научных достижений в практической фармации: Тез. докл. респ. науч. конф., 16–18 окт. 1991 г. Харьков. – 1991. – C. 155–156.
2. Государственная Фармакопея СССР. – 11-е изд. – Т.1.(1985). – М.: Медицина, 1987. – 336 с.
3. Государственная Фармакопея РФ. – 12-е изд. – Часть 1(2008). – М.: Медицина, 2008. – 704 с.
4. Литвиненко А.В., Тарасова Р.И., Пинягин К.В. Контроль за качеством фосфабензида // Казан. мед. журн. – 1995. – Т. 76, № 3. – С. 204–205.
5. Разработка методик контроля качества биологически активного вещества Na-CPAH, обладающего нейротропной активностью / Е.А. Макарова, С.А. Сидуллина, И.И. Семина, Р.И. Тарасова, Р.И. Мустафин // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 5. – URL: http://www.science-education.ru/105-7330.
6. Синтез и нейротропная активность в ряду гидразидов фосфорилуксусных кислот / Е.А. Макарова, Р.И. Тарасова, И.И.Семина, Ш.А. Фаттахов, Е.В. Шиловская, И.П. Пашина, А.З. Байчурина, О.В. Воскресенская, Р.С. Гараев // Фундаментальные исследования. – 2012. – № 8 (ч. 2). – С. 470–473.
7. Психотропная активность незамещенных производных фосфорилацето-гидразидов / И.И. Семина, Н.А. Тихонова, А.З. Байчурина, Е.В. Шиловская, Р.И. Тарасова, Р.С. Гараев // Хим.-фарм. журнал. – 2002. – Т. 36, в. 2. – С. 3–5.
8. Структура и биологическое действие потенциальных психотропных средств фосеназида и КАПАХ. Сравнительный анализ / Р.И. Тарасова, И.И. Семина, О.В. Воскресенская, М.Л. Ларина, Э.А. Мухутдинов, И.А. Литвинов, А.Т. Губайдуллин // Хим.-фарм. журнал. – 2007. – Т. 41, № 2. – С. 11–14.

Поиск новых лекарственных препаратов с нейротропной активностью привел к открытию нового ряда биологически активных веществ (БАВ) – гидразидов фосфорилированных уксусных кислот. Ранее сотрудниками кафедры фармакологии ГБОУ ВПО «КГМУ МЗ РФ» было установлено, что данные БАВ проявляют выраженные психотропные свойства, обладают антигипоксической активностью, улучшают процессы восприятия и запоминания, обладают низкой токсичностью и не проявляют антихолинэстеразной активности [7, 8].

Одним из наиболее активных представителей этого ряда является натриевая соль ацетилгидразино-4-хлорфенилфосфиновой кислоты (Na-CPAH), синтезированная на кафедре органической химии ГБОУ ВПО КНИТУ. В предыдущих работах мы установили, что исследуемое БАВ обладает выраженной антидепрессивной активностью и способностью положительно влиять на процессы обучения и памяти [6], а также разработали оптимальные методики качественного и количественного анализа Na-CPAH [5].

Важной задачей фармацевтического анализа является определение содержания посторонних примесей в лекарственных препаратах. В этой связи представляло интерес провести экспериментальную работу по выбору условий определения посторонних примесей в Na-CPAH. [1].

Целью настоящей работы является разработка методик определения доброкачественности субстанции Na-CPAH, необходимых для оценки качества данного лекарственного вещества с целью ее стандартизации.

Объектом исследования является субстанция БАВ Na-CPAH, физико-химичекие свойства которого нами были ранее изучены [5]. В качестве обязательных параметров доброкачественности ГФ регламентирует включать в ФС следующие разделы: «прозрачность раствора», «цветность раствора», «рН», «посторонние примеси», «потеря в массе при высушивании», «хлориды», «сульфаты», «сульфатная зола и тяжелые металлы», «мышьяк» и т.д. [2, 3].

Параметр «прозрачность раствора» определяли путем визуального сравнения одинакового объема испытуемой жидкости с эталоном I при освещении электрической лампы матового стекла мощностью 40 Вт, расположенной над образцом, просматривая растворы перпендикулярно вертикальной оси пробирок на черном фоне через 5 мин после приготовления эталона. Опалесценция анализируемого раствора не должна превышать опалесценцию эталона.

Прозрачность раствора. 0,1 г субстанции растворяют в 10 мл свежепрокипяченной и охлажденной воды. Полученный раствор должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном I.

Цветность раствора определяли по стандартам для бесцветных жидкостей – раствор анализируемого вещества должен выдерживать сравнение с эталоном В9. Сравнивали окраску в отраженном свете на матово-белом фоне.

Цветность раствора. Окраска раствора, полученного в испытании на прозрачность раствора, должна быть бесцветной или выдерживать сравнение с эталоном B9.

Посторонние примеси. Хроматографические методы анализа примесей в препаратах являются наиболее чувствительными и избирательными, позволяющими определить чистоту лекарственного вещества.

Синтез натриевой соли ацетилгидразино-4-хлорфенилфосфиновой кислоты состоит из трех стадий [6].

I стадия.

pic_71.wmf

II стадия.

pic_72.wmf

III стадия.

pic_73.wmf

Одной из возможных примесей является промежуточный продукт синтеза ацетилгидразино-4-хлорфенилфосфиновая кислота (III) (HO-CPAH). Нами предложена методика определения чистоты БАВ Na-CPAH методом ТСХ. Были проведены экспериментальные исследования по параметрам методики, приведенным ниже.

Для хроматографирования выбраны пластины Sorbfil (10×15 см), марка ПТСХ-АФ-А-УФ, аналитические (ТУ 26-11-17-89), на алюминиевой подложке.

В качестве стандартного образца вещества свидетеля (СОВС) использовалась ацетилгидразино-4-хлорфенилфосфиновая кислота (чистота 100 %), полученная в лаборатории органического синтеза КНИТУ. Данное соединение было охарактеризовано с помощью спектральных методов анализа в инфракрасной и ультрафиолетовой областях.

Чувствительностью обнаружения примеси 0,25 мкг.

Определен способ детектирования – в ультрафиолетовом свете при 254 нм.

Предварительно изучена хроматографическая подвижность Na-CPAH и его возможных примесей в нижеприведенных системах растворителей, рекомендованных для фосфорорганических соединений [4]:

1. Хлороформ:ацетон:этанол (6:6:1).

2. Хлороформ:ацетон (1:1).

3. Хлороформ:этанол:аммиак (15:35:1).

4. Хлороформ:ацетон:этанол:вода (24:4:4:1).

5. Ацетон:этанол:аммиак (10:10:0,5).

6. Хлороформ:ацетон:этанол (9:3:1).

7. Бензол:этанол (9:1).

8. Этанол:бензол:аммиак (30:20:1).

9. Этанол:хлороформ:NaOH (80:20:5).

Изучена возможность использования в качестве подвижной фазы воды, ацетона, хлороформа, спирта этилового, эфира, раствора аммиака, а также смесей указанных растворителей.

Для наиболее эффективного анализа веществ нами было проведено изучение оптимального количества наносимого вещества и его примеси. С этой целью наносили на линию старта хроматографических пластинок вещества в количестве 5, 10, 50, 100 и 200 мкг/мл.

На линию старта хроматографической пластинки «Sorbfil» наносили 100 мкг/мл водного раствора исследуемого БАВ и 0,5 мкг/мл его возможной примеси (HO-CPAH), хроматографирование осуществляли восходящим способом.

На основании результатов проведенных исследований для определения примесей в субстанции Na-CPAH выбрана система растворителей – этанол:хлороформ:аммиака раствор концентрированный 25 % (80:20:5), в которой пятна изучаемой субстанции БАВ и примеси HO-CPAH (Rf 0,58 и 0,42 соответственно) компактны, имеют четкие границы и достаточную степень разделения.

Проверка пригодности хроматографической системы проводится по хроматограмме образца субстанции, содержащего известное количество примеси: пятна должны быть четко видны на хроматограмме и разделяться между собой (рис. 1).

Ацетилгидразино-4-хлорфенилфосфиновая кислота – посторонняя примесь БАВ Na-CPAH ‒ была обнаружена лишь в одной из пяти серий субстанции (рис. 2).

Посторонние примеси. Определение проводят методом ТСХ.

Испытуемый раствор: 0,1 г субстанции растворяют в 10 мл воды очищенной.

На линию старта пластинки «Sorbfil» (10×15 см) наносят 10 мкл (100 мкг) испытуемого раствора и раствор СОВС, содержащий 0,5 мкг примеси. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру со смесью этанол:хлороформ:аммиака раствор концентрированный 25 % (80:20:5) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе и просматривают в УФ-свете при 254 нм. Пятно посторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора по совокупности величины и интенсивности поглощения не должно превышать пятно на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5 %).

pic_74.wmf

Рис. 1. Хроматограмма проверки пригодности хроматографической системы. Условные обозначения: pic_75.wmf и pic_76.wmf– Na-CPAH;pic_77.wmf и pic_78.wmf – HO-CPAH

Потерю в массе при высушивании для изучаемой субстанции предлагается определять при температуре 100–105 °С. Субстанцию высушивали до постоянной массы.

Потеря в массе при высушивании. Около 0,5 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре от 100 до 105 °С до постоянной массы. Потеря в массе не должна превышать 0,5 %.

pic_79.wmf

Рис. 2. Хроматограмма определения посторонних примесей в субстанции Na-CPAH

Содержание хлоридов в анализируемом БАВ определяли согласно требованиям ГФ. Опалесценция, появившаяся в испытуемом растворе, не должна превышать эталон. Предельная чувствительность реакции – 0,0001 мг (0,1 мкг) хлорид-иона в 1 мл раствора.

Хлориды. 0,5 г субстанции растворяют в 25 мл воды. 10 мл полученного раствора должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,01 % в субстанции).

Содержание сульфатов в изучаемом БАВ основывалось на способности сульфат-ионов образовывать с растворами солей бария белый осадок. Испытуемый раствор должен выдерживать испытание в сравнении с эталоном.

Сульфаты. 10 мл раствора, полученного в испытании на хлориды, должны выдерживать испытание на сульфаты (не более 0,05 % в субстанции).

Для определения сульфатной золы точную навеску субстанции помещали в предварительно взвешенный фарфоровый тигель, смачивали в 1 мл серной кислоты концентрированной и прокаливали при температуре около 600 °С до постоянной массы в муфельной печи. По окончании прокаливания тигель охлаждали в эксикаторе и взвешивали.

Сульфатная зола и тяжёлые металлы. Сульфатная зола из 1 г субстанции (точная навеска) не должна превышать 0,1 % и должна выдерживать испытание на тяжёлые металлы (не более 0,0005 % в субстанции).

Мышьяк. 0,5 г субстанции не должны давать реакции на мышьяк.

Выводы

1. Разработанные методики определения прозрачности, цветности раствора, рН, потери в массе при высушивании, примесей хлоридов, сульфатов, мышьяка, сульфатной золы и тяжелых металлов позволяют надежно контролировать доброкачественность БАВ Na-CPAH.

2. Подобранные оптимальные условия хроматографирования БАВ Na-CPAH способствуют высокочувствительному определению посторонних примесей в субстанции.

Рецензенты:

Егорова С.Н., д.фарм.н., профессор, заведующая кафедрой ФПК и ППС, ГБОУ ВПО «КазГМУ», г. Казань;

Шакирова Д.Х., д.фарм.н., профессор кафедры управления и экономики фармации, ГБОУ ВПО «КазГМУ», г. Казань.

Работа поступила в редакцию 04.02.2013.


Библиографическая ссылка

Макарова Е.А., Сидуллина С.А., Семина И.И., Тарасова Р.И., Мустафин Р.И. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОСТИ НОВОГО БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ВЕЩЕСТВА С НЕЙРОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Na-CPAH // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 3-1. – С. 193-196;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=31176 (дата обращения: 18.11.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074