Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

РОЛЬ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ НАРУЖНОГО ГЕНИТАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА У ЖЕНЩИН

Османова Ф.Т. 1
1 Клинический родильный дом № 5 им. Ш. Алескеровой
Приведенные данные показали, что изменения в иммунной системе при наружном генитальном эндометриозе характеризуются нарушениями антипролиферативных компонентов иммунной системы (снижением цитотоксической активности NK-клеток в периферической крови и перитонеальной жидкости и снижением способности лейкоцитов периферической крови к продукции ИФН-a/b и ИФН-g); повышением количества перитонеальных макрофагов, а также секретируемых ими провоспалительных цитокинов и хемокинов как в перитонеальной жидкости, так и в эндометриоидных имплантах, что свидетельствует о важной роли воспалительной реакции в генезе генитального эндометриоза. Произведена оценка локальной секреции цитокинов, таких как хемокины, ангиогенные и ростовые факторы в перитонеальной жидкости больных НГЭ исупернатантах, полученных при органотипическом культивировании эндометриоидных гетеротопий и эутопического эндометрия.
наружный генитальный эндометриоз
компоненты иммунной системы
перитонеальная жидкость
1. Брагин Б.И. Особенности внутриклеточного синтеза цитокинов и активации Т-хелперов на системном и локальном уровнях у женщин репродуктивного возраста при различных формах генитального эндометриоза: автореф. дис. ... канд. мед. наук. – М., 2004. – 26 с.
2. Селютин A.B., Денисова В.М. Особенности иммунного ответа Thl/Th2 при наружном генитальном эндометриозе // Мать и дитя: материалы 2-го регионального научного форума. – Сочи, 2008. – С. 154–155.
3. Ярмолинская М.И., Сельков С.А. Значение иммуноориентированной терапии в реабилитации больных наружным генитальным эндометриозом // Вестник восстановительной медицины. – 2007. – № 3 (21). – С. 4–8.
4. Khan K.N., Masuzaki H., Fujishita A., Kitajima M. Regulation of hepatocyte growth factor by basal and stimulated macrophages in women with endometriosis // Hum Reprod. – 2005. – Jan. 20(1). – P. 49–60.
5. Kitawaki J. Adenomyosis: the pathophusiologu of an oestrogen-depent disease // Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol. – 2006. – Aug. 20(4). – P. 493–502.
6. Kligman L, Grifo J. Lessey B.A., Palomino W.A. Estrogen receptor-alpha and defects in uterine receptivity in women // Reprod Biol Endocrinol. – 2006. – № 4. – Suppl.l :59.
7. Levent 122. Lin Y.J., Lai M.D., Lei H.Y., Wing L.Y. Neutrophils and macrophages promote angiogenesis in the early stage of endometriosis in mouse model // Endocrinology. – 2006. – Mar. 147(3). – P. 1278–86.
8. Lin Murakami K., Nomura K., Shinohara K., Kasai Т. Danazol inhibits aromatase activity of endometriosis-derived stromal cells by a competitive mechanism // Fertil Steril. – 2006. – Aug. 86(2). – P. 291–7.

Генитальный эндометриоз – широко распространенное заболевание у женщин репродуктивного и перименопаузального возраста [1, 2]. Эндометриоз является хроническим, прогрессирующим и рецидивирующим заболеванием, поражающим 12–60 % женщин репродуктивного возраста, которое характеризуется эктопическим разрастанием эндометрия [4, 5]. Эндометриоз является одной из самых распространенных причин болевого синдрома, проявляется дисменореей, диспареунией и приводит к бесплодию. Частота бесплодия при всех локализациях генитального эндометриоза примерно в 3–4 раза превышает частоту бесплодия в популяции, а частота самопроизвольного прерывания беременности (чаще в 1 триместре) колеблется от 10 до 50 % [3, 6].

Понимание важной роли иммунной системы в развитии эндометриоза наметило новые пути изучения патогенеза заболевания и новые подходы к лечению больных [7, 8]. Весьма актуальным представляется изучение возможностей селективной стимуляции защитных функций мононуклеарных фагоцитов и цитотоксических лимфоцитов с использованием активирующих цитокинов и их ансамблей. Поэтому дальнейшее изучение патогенеза эндометриоза является необходимым условием для разработки эффективных методов терапии этого заболевания.

Целью исследования явилось изучение роли иммунологических факторов в патогенезе наружного генитального эндометриоза у женщин в репродуктивном и пре- и постменопаузальном периодах.

Материалы и методы исследования

При выполнении данной работы было обследовано 142 женщины с наружным генитальным эндометриозом (НГЭ). Диагноз у всех больных был установлен на основании интраоперационного обследования (лапароскопии или чревосечения), а также подтвержден результатами гистологического обследования. Степень распространенности процесса определяли в баллах по пересмотренной классификации Американского общества фертильности (R-AFS). Изучаемые группы: 84 женщины в репродуктивном периоде, 58 женщины старшей возрастной группы, из них 35 больных – в пременопаузальном возрасте, 23 пациенток – в постменопаузе.

Иммунологические методы исследования: определение цитотоксического индекса NK-клеток в периферической крови и перитонеальной жидкости оценивали в цитотоксическом тесте (Manaseki S., Searle R., 1989), где в качестве мишеней использовали клетки человеческой эритромиелоидной линии К-562, содержащие уридин, меченый тритием. Проведено изучение популяционного состава лимфоцитов периферической крови (ПК) и перитонеальной жидкости (ПЖ), цитокинов в ПК, ПЖ и супернатантах, полученных при органотипическом культивировании эндометриоидных гетеротопий и эутопического эндометрия. Определены уровни IL-1β, IL-2, IFN-γ, TNF-α, IL-4, IL-6, IL-10, хемокинов IL-8, RANTES, MCP-1, MIG, IP-10, факторов роста VEGF, bFGF, инсулиноподобного фактора роста (IGF-1), TGFβ. Продукцию цитокинов определяли с помощью метода проточной цитофлуориметрии с использованием тест-систем BD Cytometric Bead Array (BD, США) и проточного цитофлюориметра FACStrack (BD, США). Субпопуляции лимфоцитов определяли методом проточной цитофлуориметрии с помощью набора моноклональных антител «Simultest», BD Bioscience. Органотипическое культивирование эндометриоидных гетеротопий и эутопического эндометрия проводили по методике Hirata J. (1994). Статистический анализ данных осуществлялся с помощью программы электронных таблиц Microsoft Excel, которые были сформированы в соответствии с запросами проводимого исследования.

Результаты исследования и их обсуждение

Отмечены изменения антипролиферативных компонентов иммунной системы у больных НГЭ. Обнаружено достоверное снижение цитотоксической активности NK-клеток в периферической крови и перитонеальной жидкости (при НГЭ I ст. – 34,2 ± 1,6 %, при II ст. – 31,5 ± 1,1 %, при III ст. – 28,1 ± 1,1 %, при IV ст. – 25,2 ± 0,6 %), отрицательно коррелирующее со степенью распространенности заболевания (r = –0,46; p < 0,01). При анализе показателей интерферонового (IFN) статуса у больных НГЭ обнаружено повышение уровня общего сывороточного интерферона (26,4 ± 2,0 ME/мл) по сравнению с контрольной группой (7,8 ± 1,6 МЕ/мл, р < 0,05), отмечено достоверное снижение способности лейкоцитов ПК к продукции IFN-a/b и IFN-g, наиболее выраженное при НГЭ IV степени (способность к продукции IFN-a/b при НГЭ составила 84,5 ± 5,1 ME/мл и 284,8 ± 16,0 МЕ/мл в контроле, р < 0,001; способность к секреции IFN-g 21,5 ± 1,2 ME/мл и 175,2 ± 6,2 МЕ/мл соответственно, р < 0,001). У больных НГЭ в ПЖ достоверно увеличено количество перитонеальных макрофагов (1,7 ± 0,1∙109/л) по сравнению с контрольной группой (0,7 ± 012∙109/л, р < 0,01). При НГЭ содержание T-хелперов в ПЖ достоверно снижено по сравнению со значениями контроля (22,4 ± 2,3 % и 32,4 ± 3,0 % соответственно, р < 0,01), содержание цитотоксических T-лимфоцитов у больных эндометриозом достоверно выше, чем у здоровых женщин (61,4 ± 4,0 % и 51,2 ± 3,5 % соответственно, р < 0,05), значения иммунорегуляторного индекса при НГЭ ниже, чем в контроле (0,34 ± 0,02 и 0,63 ± 0,10 соответственно, р < 0,01).

В ПЖ больных НГЭ отмечено достоверное повышение содержания цитокинов по сравнению с контрольной группой: содержание IL-1β повышено в 3,5 раза, TNF-a – в 7,5 раз, IL-2 – в 1,4 раза, IL-4 – в 2,7 раза, IL-6 – в 10,7 раза, IL-8 – в 2,5 раза и IL-10 – в 7,3 раза соответственно (табл. 1).

Таблица 1

Уровень цитокинов, определяемых в перитонеальной жидкости, у больных НГЭ и в контрольной группе

Цитокины, M ± m

Больные НГЭ (n = 142)

Контрольная группа (n = 35)

IL-1β, пкг/мл

345,7 ± 24,5**

98,2 ± 15,2

TNF-α, пкг/мл

82,1 ± 8,2*

11,0 ± 2,3

IL-2, пкг/мл

13,0 ± 1,2***

9,2 ± 0,6

IL-6, пкг/мл,

538,1 ± 102,1**

46,5 ± 3,5

IL-8, пкг/мл

216,2 ± 13,5*

87,5 ± 8,4

IL-4, пкг/мл

32,3 ± 5,2**

11,2 ± 1,0

IL-10, пкг/мл

462,6 ± 94,3

64,2 ± 9,5

Примечание: *р < 0,0001, **р < 0,01, ***р < 0,05 по сравнению с контрольной группой.

У больных НГЭ в ПЖ обнаружена взаимосвязь между содержанием IFN-γ и TNF-α (коэффициент корреляции 0,89), между уровнем IFN-ү и IL-2 (коэффициент корреляции 0,87; p < 0,01), между IFN-γ и IL-4 (коэффициент корреляции 0,91; p < 0,01). При НГЭ отмечено достоверное повышение в ПЖ и ПК содержания IL-4, IL-6, IL-10 по сравнению с контролем и группой сравнения (женщины без эндометриоза с хроническими воспалительными заболеваниями органов малого таза в стадии ремиссии), особенно выраженное при рецидивах заболевания и сочетании НГЭ с аденомиозом (р < 0,01). Наиболее высокие значения цитокинов в супернатантах, полученных при культивировании эндометриоидных имплантов и эутопического эндометрия, коррелирующие с возрастанием степени распространенности заболевания, были определены для IL-6 и IL-8 (табл. 2 и 3 ).

Таблица 2

Показатели секреции интерлейкинов эндометриоидными гетеротопиями в зависимости от степени распространенности заболевания

Цитокины, пкг/мг ткани

НГЭ I–II степени (n = 65)

M ± m

НГЭ III–IV степени (n = 77)

M ± m

IL-1β

2,5 ± 1,0**

7,6 ± 1,8

IL-2

1,7 ± 0,5**

9,4 ± 1,2

IL-8

442,1 ± 45,6*

236,5 ± 156,0

TNF-α

2,2 ± 0,4

2,9 ± 0,6

IL-6

184,3 ± 12,4**

831,4 ± 105,2

Примечание: – * p < 0,001, ** p < 0,01 различия между группами больных НГЭ.

Таблица 3

Уровень секреции интерлейкинов тканью эутопического эндометрияу больных НГЭ и в контрольной группе

Цитокины, пкг/мг ткани

НГЭ I-II степени n = 65 (M ± m)

НГЭ III-IV степени n = 77 (M ± m)

Контроль n = 35 (M ± m)

IL-1β

3,6 ± 0,6**

6,6 ± 1,2*

2,7 ± 0,5

IL-2

5,4 ± 2,0**

18,2 ± 2,5*

0,8 ± 0,2

IL-8

1824,4 ± 256,3**

2765,0 ± 321,1*

1236,4 ± 221,1

TNF-α

6,8 ± 1,6

7,4 ± 1,8

2,4 ± 0,7

IL-6

223,8 ± 82,8*

572,3 ± 162,4*

165,1 ± 42,0

Примечания: –* р < 0,01 по сравнению с контрольной группой;

– ** p < 0,05 различия между группами больных НГЭ.

Установлено, что ПЖ больных НГЭ обладает высокой ангиогенной активностью по сравнению с ПЖ здоровых женщин. ПЖ больных НГЭ достоверно увеличивала процент эндотелиальных клеток (ЭК), вышедших из фазы G1\S клеточного цикла в фазу M\G2 (p < 0,01), что свидетельствует об усилении их митотической активности. Отмечено достоверное повышение содержания провоспалительных хемокинов в ПЖ больных НГЭ по сравнению с контролем (MCP-1 (моноцитарный хемотаксический белок) 612,2 ± 53,4 и 142,2 ± 12,1 пкг/мл соответственно, р < 0,001; MIG (g-интерферон индуцируемый монокин) 2274,1 ± 246,3 и 1094,2 ± 117,6 пкг/мл соответственно, р < 0,001; RANTES (хемокин, регулирующий активацию, экспрессию и секрецию нормальных Т-клеток) 11,3 ± 2,2 и 4,2 ± 0,9 мкг/мл соответственно, р < 0,01; IL-8 214,5 ± 17,6 и 87,3 ± 10,4 соответственно, р < 0,001). В ПЖ при НГЭ обнаружено достоверное повышение уровня антиангиогенного хемокина (интерферон-индуцибельный белок) IP-10, коррелирующего с увеличением степени распространенности заболевания (7932,6 ± 1051,8 пкг/мл при НГЭ и 3124,5 ± 296,2 пкг/мл в контроле, р < 0,01).

В ПЖ больных НГЭ повышено содержание следующих ростовых факторов: VEGF (фактор роста эндотелия сосудов) 897,3 ± 144,11 и 213,9 ± 12,7 пкг/мл в контроле, p < 0,001; инсулиноподобного фактора роста (IGF-1) 6897,4 и 4537,2 пкг/мл соответственно, p < 0,01; ангиогенина 24376,2 ± 1207,1 и 8739,8 ± 658,9 пкг/мл соответственно, p < 0,001. Отмечено достоверное повышение уровня ангиогенина (30196,2 ± 1874,6 пкг/мл) и VEGF (1713,5 ± 286,3 пкг/мл) в супернатантах.

Заключение

В перитонеальной жидкости больных НГЭ содержание IL-1β в 3,5 раза выше, чем в контрольной группе, IL-2 в 1,4 раза, TNF-a в 7,5 раз, IL-4 в 2,7 раза, IL-6 в 10,7 раза, IL-8 в 2,5 раза и IL-10 в 7,3 раза соответственно. Наиболее высокие значения цитокинов в супернатантах, полученных при культивировании эндометриоидных имплантов и эутопического эндометрия, были получены для IL-6 и IL-8, что свидетельствует о том, что в основе генитального эндометриоза лежит воспалительная реакция. При НГЭ наблюдается иммунный ответ по Th2 типу, который характеризуется повышением в перитонеальной жидкости и периферической крови IL-4 на 60 и 84 % соответственно по сравнению с контролем, IL-6 на 96 % и 71 %, IL-10 на 128 и 42 %, особенно выраженным при рецидивах заболевания и сочетании НГЭ с аденомиозом, что свидетельствует о неэффективности воспалительной реакции при данном заболевании.

Системная воспалительная реакция при НГЭ характеризуется достоверным повышением содержания провоспалительных хемокинов в перитонеальной жидкости (MCP-1 в 4,3 раза по сравнению с контролем, MIG в 2,1 раза, RANTES в 2,7 раз, IL-8 в 2,5 раза), которое отражает возможность привлечения иммунокомпетентных и других клеток, определяющих воспалительную реакцию, в очаг формирования и развития гетеротопий.

Рецензенты:

Агаев И.А., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой эпидемиологии Азербайджанского медицинского университета, заслуженный деятель науки, г. Баку;

Векилов В.Н., д.м.н., профессор кафедры общественного здоровья и организации здравоохранения Азербайджанского медицинского университета, г. Баку.

Работа поступила в редакцию 23.07.2013.


Библиографическая ссылка

Османова Ф.Т. РОЛЬ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ НАРУЖНОГО ГЕНИТАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА У ЖЕНЩИН // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 9-1. – С. 108-111;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32188 (дата обращения: 12.11.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074