Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,087

СТАНДАРТИЗАЦИЯ ПРОПОЛИСА НАСТОЙКИ

Браславский Н.В. 1 Шаталаев И.Ф. 1
1 ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Минздрава России
Обсуждаются результаты исследования стандартизации серийных образцов лекарственного средства «Прополиса настойка» российских производителей методом спектрофотометрии и разработка на этой основе методик определения подлинности c использованием прямой и дифференциальной спектроскопии после добавления 3 % спиртового раствора AlCl3 и количественного определения биологически активных соединений в препарате. Разработаны методики определения подлинности и количественного определения суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в препарате «Прополиса настойка» методом спектрофотометрии с использованием государственного стандартного образца (ГСО) пиностробина. При помощи разработанной методики определено количественное содержание суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в заводских серийных образцах «Прополиса настойка». Содержание суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в препарате в пересчете на пиностробин колебалось от 1,4 до 2,1 % и во всех образцах составляет более 1,0 %. Приведены метрологические характеристики разработанной методики. Разработанные методики включены в проект фармакопейной статьи «Прополиса настойка».
стандартизация
прополиса настойка
спектрофотометрия
подлинность
количественное определение
флавоноиды и фенилпропаноиды
пиностробин
государственный стандартный образец (ГСО)
1. Браславский В.Б. Сравнительные исследования видов Salicaceae и прополиса – перспективных источников антимикробных и противовоспалительных лекарственных средств / В.Б. Браславский, В.А. Куркин, Н.В. Браславский // Экология и здоровье человека: тезисы докладов XI Всероссийский конгресс. –Самара, 2006. – С. 41–45.
2. Браславский В.Б. Стандартизация сырья и препаратов тополя и прополиса / В.Б. Браславский, В.А. Куркин // Фармация. – 2009. – Т. 57, № 4. – С. 53–56.
3. Растения семейства ивовых и прополис – перспективные источники фитопрепаратов / В.Б. Браславский, В.А. Куркин, Н.В. Браславский, И.Ф. Шаталаев // Традиционная медицина. – 2011. – № 5. – С. 159–163.
4. Комплексные фармакогностические исследования растений семейства ивовых и прополиса – источников лекарственных средств / В.Б. Браславский, В.А. Куркин, Н.В. Браславский, И.Ф. Шаталаев // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2011. – Т. 13 (39), № 1 (8). – С. 1978–1981.
5. Государственный реестр лекарственных средств. – Т. 1. Официальное издание. – М.: Ремедиум, 2008. – 1398 с.
6. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов). – 2-е изд., перераб. и доп. – Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2007. – 1239 с.
7. Самылина И.А. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных средств // Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты: материалы I Международного научного конгресса. – М.: Институт традиционных методов лечения МЗ РФ, 1994. – С. 254.
8. Ценный продукт пчеловодства: прополис / под рук. В. Харнажа. – 4-е изд., перераб. и доп. – Бухарест: Изд-во Апимондии, 1981 – 248 с.
9. Bankova, V.S. Chemical diversity of propolis and the problem of standardization / V. Bankova // Journal of Ethnopharmacology. – 2005. – № 100. – P. 114–117.
10. Wollenweber E. A Novel Caffeic Acid Derivative and Other Constituents of Populus Bud Excretion and Propolis (Bee Glue) / E. Wollenweber, Y. Asacawa, D. Schillo, U. Lehmann and H. Weigel // Z. Naturforsch. C: Biosci. – 1987. – Bd. 42C, № 9–10. – Р. 1030–1034.

В современной стандартизации лекарственного сырья и препаратов, в фармацевтическом анализе актуальными являются подбор, совершенствование и разработка современных и специфичных методик определения подлинности и качества, отвечающих требованиям валидации и соблюдению системного подхода в ряду «сырьё – препарат» [7].

Для продукта пчеловодства – сырья прополиса, имеющего широкий ареал сырьевой базы [1–4, 6], включенного в государственный реестр лекарственных средств РФ [5] и являющегося источником эффективных и безопасных антибактериальных и регенерирующих лекарственных средств [1, 3, 4, 6, 8, 9], ранее были разработаны современные и специфичные подходы к стандартизации [1–4, 6].

Фармакологическая активность препаратов прополиса обусловлена компонентным составом биологически активных соединений (БАС), который как по литературным данным, так и по результатам наших исследований близок к составу тополя почек, но вариабелен и определяется химическим составом преобладающих растительных источников (тополь и др.) [1–4, 6, 8–10]. Популярным лекарственным средством является «Прополиса настойка» (рег. № 90/111/3, Фармакопейная статья (ФС) 42-3736-99) [5, 6].

Актуальна проблема совершенствования фармакопейного анализа для лекарственных средств на основе прополиса, в случае которых стандартизация недостаточно специфична и современна – осуществляется без использования стандартного образца, а методики не в полной мере отвечают параметрам валидации и системного подхода в ряду «сырье – лекарственное средство» [1–4, 6, 7, 9].

Цель исследования ‒ разработка методик определения подлинности и количественного определения биологически активных соединений прополиса настойки.

Материал и методы исследования

Были исследованы серийные образцы лекарственного средства «Прополиса настойка» российских производителей, представленные в табл. 1.

Таблица 1

Содержание суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в образцах препарата «Прополиса настойка» российских производителей

Номер образца

Наименование производителя (серия)

Содержание флавоноидов и фенилпропаноидов, (%)

1

ОАО «Татхимфармпрепараты», г. Казань (240709)

1,98 ± 0,087

2

ООО «Тульская фармацевтическая фабрика», г. Тула (20211)

1,66 ± 0,073

3

ООО «Тульская фармацевтическая фабрика», г. Тула (91012)

1,91 ± 0,084

4

ООО «БЭГРИФ», г. Бердск Новосибирской области (030411)

1,95 ± 0,086

5

ООО «БЭГРИФ», г. Бердск Новосибирской области (090912)

1,37 ± 0,060

6

ООО «Гиппократ», г. Самара (04112010)

1,49 ± 0,066

7

ООО «Гиппократ», г. Самара (03072012)

1,67 ± 0,074

8

ЗАО «Московская фармацевтическая фабрика», г. Москва (210810)

2,02 ± 0,089

9

ООО «ВАТХЭМ – ФАРМАЦИЯ», г. Рязань (011110)

1,55 ± 0,068

10

ЗАО «ВИФИТЕХ», Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск (040111)

2,06 ± 0,091

11

ЗАО «ВИФИТЕХ», Московская область, Серпуховский район, п. Оболенск (081012)

1,58 ± 0,070

12

ОАО «Тверская фармацевтическая фабрика», г. Тверь (130809)

1,90 ± 0,084

13

ОАО «Тверская фармацевтическая фабрика», г. Тверь (290910)

1,64 ± 0,073

Регистрацию спектров проводили с помощью спектрофотометра «Specord 40» (Analytik Jena AG, Germany) в диапазоне длин волн 190–500 нм.

Результаты исследования и их обсуждение

Исследование электронных спектров поглощения света образцов прополиса настойки исходной и после добавления к 1 мл настойки 1 мл 3 % спиртового раствора алюминия хлорида (AlCl3) с последующим разведением 1:2500 (рис. 1–3), а также дифференциальных (рис. 1.1–3.1) показало, что аналогично сырью прополиса и тополя почек характер суммарных кривых поглощения электронных спектров определяется в основном веществами флавоноидной природы. Общим для электронных спектров всех исследованных образцов является выраженное поглощение света в УФ-области (в интервале от 260 до 330 нм) – основной максимум поглощения спектра находится около 290 ± 2 нм, а после добавления к 1 мл настойки 1 мл 3 % раствора AlCl3 – дает батохромный сдвиг в УФ-область 307 ± 3 нм (флаваноны пиностробин и др.), а в видимой области спектра – 407 ± 10 нм (рис. 1–3 и 1.1–3.1). Большинство спектров образцов прополиса настойки ближе к «тополиному» типу прополиса (образцы № 1–7, 9–11, 13), некоторые – к «смешанному» типу (образцы № 8 и 12). Исходные кривые образцов «смешанного» типа отличаются от других более высоким поглощением в области 320 ± 5 нм.

pic_80.tif

Рис. 1. Спектр раствора образца прополиса настойки № 3. Обозначения: 1 – раствор настойки исходный (разведение 1:2500), 2 – с добавлением к 1 мл настойки 1 мл 3 % спиртового раствора AlCl3 (разведение 1:2500)

pic_81.tif

Рис. 1.1. Дифференциальный спектр раствора прополиса настойки № 3 с добавлением к 1 мл настойки 1 мл 3 % спиртового раствора AlCl3 относительно исходного (разведение 1:2500)

pic_82.tif

Рис. 2. Спектр раствора образца прополиса настойки № 12. Обозначения те же

pic_83.tif

Рис. 2.1. Дифференциальный спектр раствора прополиса настойки № 12

В дифференциальных спектрах (рис. 1.1–3.1) всех исследованных образцов препарата прополиса (после добавки AlCl3 по сравнению с исходным) наблюдаются отчетливо выраженные максимумы поглощения при 225 ± 2, 281 ± 1, 312 ± 3, 407 ± 4 нм. Кроме того, для всех дифференциальных спектров образцов препарата прополиса характерны выраженные минимумы поглощения при 213 ± 1, 266 ± 3, 289 ± 3, 356 ± 3 нм.

В спектре спиртового раствора ГСО пиностробина (рис. 3) присутствуют максимумы поглощения при 213, 289 нм и плечо при 320 нм, минимумы – при 204, 247 нм. После добавления AlCl3 (рис. 3) в спектре наблюдается батохромный сдвиг соответствующих максимумов (222, 308 и 376 нм) и минимумов (212, 255 и 333 нм) поглощения света. Дифференциальная кривая ГСО в целом согласуется с таковыми препаратов прополиса (рис. 3.1).

pic_84.tif

Рис. 3. Спектр спиртового раствора образца пиностробина (разведение 1:125000). Обозначения: 1 – раствор исходный, 2 – с добавлением к 1 мл исходного 1 мл 3 % спиртового раствора AlCl3

pic_85.tif

Рис. 3.1. Дифференциальный спектр спиртового раствора пиностробина с добавлением к 1 мл раствора А 1 мл 3 % спиртового раствора AlCl3 относительно исходного (разведение 1:125000)

Предлагаем для усиления подлинности препарата «Прополиса настойка» ввести в нормативную документацию (НД) на сырье и препараты прополиса характеристику электронного спектра как прямого (исходного), так и дифференциального. Электронный спектр сырья прополиса и лекарственного средства «Прополиса настойка» должен иметь выраженный максимум поглощения в области 290 ± 2 нм и выраженный минимум при 252 ± 3 нм. Характерный дифференциальный спектр сырья прополиса и препарата «Прополиса настойка» после добавления раствора AlCl3 должен иметь выраженные максимумы поглощения света: при 225 ± 2, 280 ± 2 нм, при 312 ± 3, 406 ± 3 нм и выраженные минимумы: при 213 ± 1, 267 ± 3, 289 ± 3, 356 ± 3 нм.

В методике количественного определения суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в препаратах прополиса методом прямой спектрофотометрии с использованием ГСО пиностробина, также как и для сырья прополиса и почек тополя в качестве аналитической была выбрана длина волны 289 нм, соответствующая максимуму поглощения ГСО пиностробина [1–4, 6]. Методика количественного определения суммы БАС в лекарственном средстве «Прополиса настойка» унифицирована с сырьем прополиса [1–4, 6] и выглядит следующим образом: 1,00 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки 96 % спиртом и перемешивают (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки 96 % спиртом и перемешивают (раствор Б). Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 289 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора Б ГСО пиностробина. В качестве раствора сравнения используют 96 % этиловый спирт. Содержание суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в препарате в процентах (Х) в пересчете на пиностробин вычисляют по формуле:

Eqn255.wmf

где D – оптическая плотность испытуемого раствора (раствор Б); D0 – оптическая плотность раствора Б ГСО пиностробина; m0 – масса ГСО пиностробина, г; V – объем испытуемого препарата, мл.

Приготовление раствора ГСО пиностробина. Около 0,02 г (точная навеска) ГСО пиностробина (ФС 42-0073-00) растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в 80 мл 96 % спирта при нагревании (70–75 °С). Содержимое колбы охлаждают и доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А). 1 мл полученного раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 96 % спиртом этиловым (раствор Б).

Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что относительная ошибка отдельного определения с доверительной вероятностью 95 % составляет 4,44 % (табл. 2).

Таблица 2

Метрологические характеристики методики определения суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в препарате «Прополиса настойка»

f

x, %

s

P, %

t (P, f)

Dx

e, %

10

1,655

0,033

95

2,23

± 0,074

± 4,44

f – число степеней свободы;

x – среднее выборки;

s – стандартное отклонение;

Р – доверительная вероятность;

t(P, f) – значение критерия Стьюдента;

Dx – полуширина доверительного интервала;

ε – относительная ошибка отдельного определения.

Опыты с добавками ГСО пиностробина к препарату показали, что ошибка опыта находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки разработанной методики (табл. 3).

Таблица 3

Результаты опытов с добавками ГСО пиностробина

№ п/п

Содержание действующих веществ в 1 мл препарата (мг)

Добавлено ГСО пиностробина (мг)

Найдено (мг)

Ошибка

Абсолютная (мг)

Относительная (%)

1

16,4 ± 0,7

11,1

27,1 ± 1,2

–0,4

–1,46

2

16,4 ± 0,7

22,2

37,1 ± 1,7

–1,5

–3,89

3

16,7 ± 0,7

11,1

28,7 ± 1,3

+0,9

+3,24

4

16,7 ± 0,7

22,2

40,2 ± 1,8

+1,3

+3,34

Разработанная методика количественного определения суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в препарате включена в проект ФС «Прополиса настойка».

Проведено количественное определение содержания суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в препарате «Прополиса настойка» в пересчете на ГСО пиностробина, оно составило от 1,4 до 2,1 % (табл. 1). Данный показатель рекомендован для включения в проект ФС на лекарственное средство «Прополиса настойка» – не менее 1,0 %.

Выводы

1. Разработаны унифицированные с сырьем новые методики определения подлинности прополиса настойки, заключающиеся в использовании прямой и дифференциальной спектроскопии после добавки треххлорного алюминия.

2. Разработана унифицированная методика количественного спектрофотометрического определения содержания суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в прополиса настойке с использованием ГСО пиностробина, которая рекомендована для включения в проект ФС «Прополиса настойка» взамен ФС 42-3736-99. Результаты статистической обработки проведенных определений свидетельствуют о том, что относительная ошибка отдельного определения с доверительной вероятностью 95 % составляет 4,44 %.

3. При помощи разработанной методики определено количественное содержание суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в заводских серийных образцах «Прополиса настойка», которое колебалось от 1,4 до 2,1 %. Для ФС рекомендуется нижний предел данного показателя – не менее 1,0 %.

Рецензенты:

Куркин В.А., д.фарм.н., профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии, ГБОУ ВПО СамГМУ Минздрава России, г. Самара;

Первушкин С.В., д.фарм.н., профессор, заведующий кафедрой фармацевтической технологии, ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, г. Самара.

Работа поступила в редакцию 01.08.2013.


Библиографическая ссылка

Браславский Н.В., Шаталаев И.Ф. СТАНДАРТИЗАЦИЯ ПРОПОЛИСА НАСТОЙКИ // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10-1. – С. 148-153;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32234 (дата обращения: 06.06.2020).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074