Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

ИССЛЕДОВАНИЕ СВОБОДНЫХ АМИНОКИСЛОТПЛОДОВ СОФОРЫ ЯПОНСКОЙ

Ковалева Л.Г. 1 Никифорова Е.Б. 1
1 ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет Минздрава России»
Целью исследования являлось изучение качественного состава и количественного содержания свободных аминокислот плодов софоры японской.Объектом исследования служили образцы плодов софоры японской собственной и промышленной заготовки. Качественное обнаружение аминокислот проводили в водных извлечениях с помощью нингидриновой реакции, а также методом бумажной хроматографии. Детальное исследование аминокислот проводили методом капиллярного электрофореза на приборе «Капель-103Р»,основываясь на разделении анионных форм N-фенилтиокарбамил-производных аминокислот под действием электрического поля вследствие их различной электрофоретической подвижности. Электрофорез проводили под напряжением в 10 кВольт. Для идентификации и количественного определения анализируемых компонентов регистрировали ультрафиолетовое поглощение при длине волны 254 нм. Градуировку прибора осуществляли при помощи калибровочных растворов стандартных образцов аминокислот. Найдено, чтов плодах софоры японской присутствуют: аргинин, лейцин, метионин, валин, пролин, треонин, триптофан, серин, α-аланин, глицин, пять из которых (лейцин, метионин, валин, треонин, триптофан) относятся к разряду незаменимых. Общее количество свободных аминокислот в изученных образцах сырья колебалось от 658,04 до 756,45 мг/кг, в среднем же оно составило 712,49 мг/кг с преобладающим содержанием пролина и глицина.
плоды софоры японской
свободные аминокислоты
капиллярный электрофорез
1. Ахмедходжаева Н.М. К вопросу определения флавоновых соединений в плодах софоры японской // Фармация. – 1986. – Т.35. – № 5. – С. 61–62.
2. Дрозд Г.А., Горбачева Л.А.Фармакогностическо-иммунологическое изучение плодов софоры японской (SophorajaponicaL.) // Фармация. – 1994. – № 1. – С. 34–37.
3. Дроздова И.Л., Денисова Н.Н. Изучение аминокислотного состава травы короставника полевого// Традиционная медицина. – 2012. – № 29. – С. 49–51.
4. Исследование аминокислотного состава водорастворимых комплексов цветков ноготков и кукурузных рылец / А.М. Сампиев, Е.Б. Никифорова, М.Р. Хочава, М.М. Дзаурова // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы IX Международного съезда «Фитофарм 2005» и конференции молодых ученых Европейского фитохимического общества«Растения и здоровье» (Санкт-Петербург, 22–25 июня, 2005 г.). – Санкт-Петербург:НИИХ СПбГУ, 2005. – С. 764–766.
5. Комарова Н.В., Каменцев Я.С. Практическое руководство по использованию систем капиллярного электрофореза «КАПЕЛЬ». – СПб.: Веда, 2006. – С. 50–51.
6. Ковалева Л.Г., Сампиев А.М., Хочава М.Р., Никифорова Е.Б. Современное состояние и перспективы дальнейшего исследования плодов софоры японской // Научные ведомости Белгородского университета. – 2012. – № 22 (141), вып. 20. – С. 163–170.
7. Методическое и аналитическое обеспечение исследований по садоводству / под ред. Э.В. Макаровой. – Краснодар: ГНУ СКЗНИИСиВ, 2010. – 300 с.
8. Kooiman P. Structures of the galactomannas from seeds of Annonamuricata, Arengasaccharifera, Cocosnucifera, Convolvulus tricolor and Sophorajaponica // Carbohydrate research. – 1971. – № 20. – Р. 329–337.
9. Hankins C.N., Kindinger J., Shannon L.N. The lectins of Sophora japonica. II. Purification, properties and N-terminal amino acid sequences of five lectins from bark // Plant Physiol. – 1988. – Vol. 86. – Р. 67–70.
10. Sun A., Sun Q., Liu R. Preparative isolation and purification of flavone compounds from Sophora japonica L. by high-speed counter-current chromatography combined with macroporeus resin column separation // J. Sep. Sci. – 2007. –Vol. 30, № 7. – Р. 1013–1018.
11. Tang Y.J. Hu. J. Wang. A new coumaronochromone from Sophorajaponica // J. Asian Nat. Prod. Res. – 2002. – Vol. 4. – Р. 1–5.

Плоды софоры японской и получаемая из них настойка используются в медицинской практике в качестве антисептического средства. Установлено, что плоды софоры являются носителем и других видов фармакотерапевтической активности, в частности они обладают противовоспалительным и иммуномодулирующим действием, ускоряют регенерацию тканей, влияют на липогенез, способны оказывать регулирующее воздействие на гемостаз [2, 6]. Вышеперечисленные лечебные эффекты, безусловно, связаны с химическим составом данного лекарственного растительного сырья (ЛРС), отличающимся заметным разнообразием биологически активных веществ (БАВ). Плоды софоры японской хорошо известны как богатый источник флавоноидов, в частности рутина, гликозидов кемпферола, генистеина и др. [1,10]. Кроме того, они содержат кумаронохромоны, полисахариды, тритерпеновые сапонины, лектины, жирное масло и др. [6, 8, 9, 11]. Среди БАВ плодов софоры японской, способных определять медицинское применение этого ЛРС, на наш взгляд, заслуживают внимания свободные аминокислоты, играющие в организме человека чрезвычайно важную роль, участвуя в белковом обмене, синтезе биогенных аминов и других процессах [3,4].

Целью исследования являлось изучение качественного состава и количественного содержания свободных аминокислот плодов софоры японской.

Материал и методы исследования

Объектом исследования служили образцы плодов софоры японской как собственной, так и промышленной заготовки.

Качественное обнаружение аминокислот проводили в водных извлечениях с помощью нингидриновой реакции, а также методом бумажной хроматографии. Для хроматографического анализа 0,03–0,05 мл полученных извлечений наносили на подготовленную хроматографическую бумагу «Filtrak» № 1 и хроматографировали в системе н.бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2) с достоверными образцами аминокислот. Хроматограммы высушивали на воздухе, обрабатывали их 0,2 % спиртовым раствором нингидрина и нагревали в сушильном шкафу при 100–105 °С в течение нескольких минут [3].

Более детальное исследование аминокислотного состава плодов софоры японской проводили методом капиллярного электрофореза на приборе «Капель-103Р» (ОАО «НПФ Люмэкс», Россия) с кварцевым капилляром Lэфф/Lобщ = 50/60 см, ID = 75 мкм. Метод основан на разделении анионных форм N-фенилтиокарбамил-производных аминокислот под действием электрического поля вследствие их различной электрофоретической подвижности. Пробоподготовку осуществляли путем СВЧ-экстракции плодов софоры японской 10 % спиртом этиловым на СВЧ-минерализаторе «Минотавр-1». Пробу сырья в количестве 1,0 г помещали во фторопластовый контейнер СВЧ-минерализатора, добавляли 25 мл 10 % спирта этилового, устанавливали контейнер в магнетрон минерализатора. Минерализацию проводили, используя режим «разложение без давления», в течение 10 мин. По истечении указанного времени контейнер извлекали из СВЧ-минерализатора, охлаждали в естественных условиях в течение 3–5 мин. Полученное извлечение количественно переносили в мерную колбу объемом 25 мл.

К пробе полученного извлечения прибавляли 10 % водный раствор карбоната натрия и раствор фенилизотиоцианата в изопропиловом спирте. Реакционную смесь перемешивали, выдерживали в течение 35 минут при комнатной температуре для прохождения реакции между фенилизотиоцианатом и свободными аминокислотами плодов софоры японской, а затем высушивали в потоке теплого воздуха. К сухому остатку прибавляли воду очищенную, тщательно перемешивали и центрифугировали при 6000 об–1 в течение 5 минут, полученную пробу (фугат) переносили в систему капиллярного электрофореза и пневматическим методом под давлением 30 миллибар в течение 5 секунд дозировали пробу в капилляр. Капилляр перед измерением подготавливали к работе, промывая его последовательно 3,5 % раствором соляной кислоты, водой очищенной, 4 % раствором гидроксида натрия и рабочим буферным раствором. Электрофорез проводили под напряжением в 10 кВольт. Анализируемую пробу дозировали в прибор не менее двух раз. Градуировку прибора осуществляли при помощи калибровочных растворов стандартных образцов аминокислот. Градуировочную смесь готовили путем смешения исходных растворов аминокислот, 10 % водного раствора карбоната натрия и раствора фенилизотиоцианата в изопропиловом спирте. Для идентификации и количественного определения анализируемых компонентов регистрировали ультрафиолетовое поглощение при длине волны 254 нм. По электрофореграмме определяли качественную характеристику вещества – время миграции и количественную (после построения градуировочной зависимости) – высоту или площадь пика, пропорциональную концентрации вещества [5, 7].

Результаты исследования и их обсуждение

Извлечения из плодов софоры японской давали положительную нингидриновую реакцию: аминокислоты проявлялись в виде красно-фиолетовых пятен.О наличии аминокислот в данном ЛРС свидетельствовали также данные хроматографического анализа. С достоверными образцами аминокислот в плодах софоры идентифицировали:аргинин, лейцин, метионин, валин, пролин, треонин, триптофан, серин, α-аланин, глицин.

Дальнейшее исследование аминокислотного состава плодов софоры японской проводили методом капиллярного электрофореза. Электрофореграмма свободных аминокислот плодов софоры японской представлена на рисунке. На основании полученных электрофореграмм при помощи программного обеспечения к прибору рассчитывали количественное содержание отдельных свободных аминокислот в пяти образцах плодов софоры японской по установленным градуировочным характеристикам. Результаты исследований приведены в таблице.

Как показывают результаты исследования, с использованием бумажной хроматографии и методом капиллярного электрофореза в плодах софоры японской обнаружены разнообразные аминокислоты: аргинин, лейцин, метионин, валин, пролин, треонин, триптофан, серин, α-аланин, глицин. Следует отметить, что пять из найденных аминокислот (лейцин, метионин, валин, треонин, триптофан) относятся к разряду незаменимых.

Общее количество свободных аминокислот в изученных образцах сырья колебалось от 658,04 до 756,45 мг/кг, в среднем же оно составило 712,49 мг/кг. В плане количественного содержания среди всех свободных аминокислот наибольшая концентрация установлена для пролина и глицина, их содержание составило примерно половину от суммарного количества всех свободных аминокислот. Около 30 % аминокислотной фракции приходится на треонин и аргинин, все остальные обнаруженные в плодах софоры аминокислоты занимают примерно 20 % от общего содержания данных БАВ в изученных объектах.

Заключение

Таким образом, в результате проведенных исследований изучен качественный состав и количественное содержание свободных аминокислот плодов софоры японской. Полученные данные свидетельствуют о том, что плоды софоры японской характеризуются существенной широтой и уровнем содержания свободных аминокислот. Установленное разнообразие и достаточно высокое количественное содержание данной группы БАВ могут стать основанием для рассмотрения свободных аминокислот как одних из фармакологически активных компонентов плодов софоры японской.

pic_62.tif

Электрофореграмма свободных аминокислот плодов софоры японской

Содержание свободных аминокислот в плодах софоры японской

Наименование свободных аминокислот

Содержание свободных аминокислот, мг/кг

Образец № 1

Образец № 2

Образец № 3

Образец № 4

Образец № 5

Аргинин

77,37 ± 15,47

52,15 ± 10,43

88,43 ± 17,69

82,90 ± 16,58

71,80 ± 14,36

Лейцин

8,13 ± 1,63

12,41 ± 2,48

10,29 ± 2,06

10,83 ± 2,17

11,53 ± 2,31

Метионин

49,12 ± 9,82

51,33 ± 10,27

57,67 ± 11,53

52,18 ± 10,44

50,61 ± 10,12

Валин

41,13 ± 8,23

38,17 ± 7,63

33,04 ± 6,61

36,71 ± 7,34

39,26 ± 7,85

Пролин

221,30 ± 44,26

197,40 ± 39,48

204,90 ± 40,98

218,20 ± 43,64

213,50 ± 64,05

Треонин

95,09 ± 19,02

107,10 ± 21,42

123,10 ± 24,62

112,60 ± 22,52

119,40 ± 23,88

Триптофан

30,37 ± 6,07

27,44 ± 5,49

28,93 ± 5,79

28,67 ± 5,73

29,51 ± 5,90

Серин

10,85 ± 2,17

13,54 ± 2,71

12,55 ± 2,51

13,18 ± 2,64

12,83 ± 2,57

α-Аланин

14,15 ± 2,83

11,86 ± 2,37

13,84 ± 2,77

11,57 ± 2,31

12,92 ± 2,58

Глицин

167,30 ± 33,46

179,80 ± 35,96

183,70 ± 36,74

174,10 ± 34,82

180,60 ± 36,12

Сумма аминокислот

714,81 ± 142,96

691,2 ± 138,24

756,45 ± 151,29

658,04 ± 131,61

741,96 ± 148,39

Примечания:

Образец 1 – ООО «СОИК», г. Москва;

Образец 2 – ООО «Сила природы», Краснодарский край, Отрадненский район;

Образец 3 – Краснодарский край, ст. Динская;

Образец 4 – Краснодарский край, г. Краснодар;

Образец 5 –Краснодарский край, ст. Васюринская.

Рецензенты:

Коновалов Д.А., д.фарм.н., заведующий кафедрой фармакогнозии Пятигорского филиала ГБОУ ВПО «Волгоградского государственного медицинского университета» Минздрава России, г. Пятигорск;

Шевченко А.М., д.фарм.н., доцент кафедры технологии лекарств Пятигорского филиала ГБОУ ВПО «Волгоградского государственного медицинского университета» Минздрава России, г. Пятигорск.

Работа поступила в редакцию 08.11.2013.


Библиографическая ссылка

Ковалева Л.Г., Никифорова Е.Б. ИССЛЕДОВАНИЕ СВОБОДНЫХ АМИНОКИСЛОТПЛОДОВ СОФОРЫ ЯПОНСКОЙ // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10-11. – С. 2487-2490;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32820 (дата обращения: 18.11.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074