Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАЛАВИТА В МЯГКОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ НА ГИДРОФИЛЬНОЙ КРЕМНИЙСОДЕРЖАЩЕЙ ОСНОВЕ

Штанько И.Н. 1 Хонина Т.Г. 1
1 ФГБУН «Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН»
Нами предложена новая мягкая лекарственная форма иммунотропного препарата галавита, в виде мази на гидрофильной кремнийсодержащей основе. Предложенное средство перспективно для внедрения в медицинскую в частности стоматологическую практику, в качестве средства для лечения воспалительных заболеваний полости рта. Необходимым условием внедрения нового лекарственного средства в медицинскую практику является его стандартизация, предусматривающая разработку нормативно-технической документации. Целью настоящей работы являлась разработка и валидация методики количественного анализа галавита в мази на гидрофильной кремнийсодержащей основе. Количественное содержание галавита определяли с помощью УФ спектроскопии. На примере модельных смесей проведена валидация методики количественного определения галавита в разрабатываемом средстве. Методика может быть рекомендована для включения в нормативно-техническую документацию на разрабатываемое средство.
галавит
кремнийсодержащий глицерогидрогель
исчерпывающая водная экстракция
УФ спектроскопия
валидация
1. Валидация аналитических методик для производителей лекарств: типовое руководство предприятия по производству лекарственных средств / под ред. В.В. Береговых. – М.: «Литтерра», 2008. – 132 с.
2. Государственная фармакопея РФ XII: В 2 ч. – М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2010. Ч. 2. – 600 с.
3. Оценка безопасности и переносимости препарата «Силативит» при применении у добровольцев / Н.Д. Чернышева, А.С. Назукин, Т.Г. Хонина, И.Н. Тосова // Вестник уральской медицинской академической науки. – 2011. – № 4 (37). – С. 121–123.
4. Руководство для предприятий фармацевтической промышленности (методические рекомендации) / под ред. Н.В. Юргеля. – М.: Спорт и культура-2000, 2007. – 192 с.
5. Синтез, токсичность и трансдермальная проницаемость глицератов кремния и гидрогелей на их основе / Т.Г. Хонина, О.Н. Чупахин, Л.П. Ларионов, Т.Г. Бояковская, А.Л. Суворов, Е.В Шадрина // Химико-фармацевтический журнал. – 2008. – № 11. – С. 5–9.
6. Стандартизованная процедура валидации методик количественного анализа лекарственных средств методом стандарта / А.И. Гризодуб, Д.А. Леонтьев, Н.В. Денисенко, Ю.В. Подпружников // Фармаком. – 2004. – № 3. – С. 1–15.
7. Тосова И.Н. Новое иммунотропное средство для местного применения / И.Н. Тосова, Т.Г. Хонина // Вестник уральской медицинской академической науки. – 2011. – № 3 (1). – С. 49.
8. Хонина Т.Г., Ларионов Л.П., Русинов Г.Л., Суворов А.Л., Чупахин О.Н. Глицераты кремния, обладающие транскутанной проводимостью медикаментозных средств, и глицерогидрогели на их основе // Патент России № 2255939. 2005. Бюл. № 19.
9. Хонина Т.Г. Фармакологически активные полиолаты кремния и титана и гидрогели на их основе: синтез, свойства, применение: дис. … д-ра хим. наук. – Казань. – 2012. – 303 с.
10. Чупахин О.Н., Симбирцев А.С., Тузанкина И.А., Хонина Т.Г., Тосова И.Н., Ларионов Л.П., Ронь Г.И., Саркисян Н.Г., Чернышева Н.Д. Средство для лечения воспалительных заболеваний полости рта и способ лечения воспалительных заболеваний полости рта // Патент России № 2470640. 2012. Бюл. № 36.
11. Huber L. Validation of analytical Methods: Review and Strategy, LC-GC 1997-1, Version February 21 // Biopharm. – 1999. – Vol. 12. No. 1. – Р. 64–66.

В настоящее время в мировой медицинской практике применяется значительное количество мягких лекарственных форм в качестве средств для местного лечения и профилактики заболеваний кожи, мягких тканей и слизистых оболочек различной этиологии. Одним из перспективных направлений в разработке новых лекарственных средств для местного применения, в частности в стоматологии, является использование иммунотропных препаратов, что обосновано быстро формирующейся резистентностью организма к антибактериальным средствам, снижением иммунологической реактивности населения, наличием маскирующих форм иммунопатологии, обусловливающих прогрессирование патологии и терапевтическую толерантность; при этом отмечается, что местное использование иммунотропных средств часто является более эффективным, чем системное введение, когда возможны выраженные побочные эффекты.

В Институте органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН разработаны фармакологически активные кремнийсодержащие глицерогидрогели [5, 8], проявляющие выраженную противовоспалительную, ранозаживляющую и регенерирующую активность. Они могут быть использованы как самостоятельные лекарственные средства для местного применения, так и в качестве мазевых основ.

В настоящее время кремнийсодержащий глицерогидрогель формального состава Si(C3H7O3)4·6C3H8O3·24H2O (препарат «Силативит») проходит клинические испытания в качестве средства для местного лечения воспалительных стоматологических заболеваний [3]. С целью внедрения данного средства в медицинскую практику был составлен полный пакет нормативно-технической документации на субстанцию и препарат «Силативит», включая Фармакопейную статью предприятия; разработана и валидирована методика количественного определения кремния в геле [9].

Учитывая актуальность использования иммунотропных средств для местного применения, нами было предложено и запатентовано новое лекарственное средство для лечения воспалительных заболеваний полости рта с использованием в качестве активного компонента галавита (0,7 мас. %) и в качестве мазевой основы – субстанции препарата «Силативит» [10]. В эксперименте на лабораторных животных была показана безопасность его применения и высокая фармакологическая активность (противовоспалительная, ранозаживляющая и регенерирующая активность) [7].

Целью настоящей работы являлась разработка методики количественного определения галавита в мази на гидрофильной кремнийсодержащей основе и определение ее валидационных характеристик.

Экспериментальная часть

Содержание галавита в разрабатываемом средстве определяли методом УФ спектроскопии на спектрофотометре фирмы Shimadzu: UV-2401 PС (Япония) в области 400–190 нм. Предварительно готовили калибровочные растворы (водные растворы субстанции галавита), регистрировали их спектры и строили калибровочную кривую (рисунок). Калибровку проводили по полосе поглощения 297 нм, характерной для субстанции галавита.

pic_63.wmf

Калибровочный график зависимости степени абсорбции от концентрации галавита (C) в исследуемом растворе

Методика количественного определения галавита основана на его исчерпывающей водной экстракции из разрабатываемого средства. 2 г (точная навеска) разрабатываемого средства растворяют в 50 мл дистиллированной воды и перемешивают на магнитной мешалке в течение 1 часа. Затем полученную водную суспензию оставляют для осаждения на сутки. После отстаивания 1 мл надосадочного раствора помещают в мерную колбу на 50 мл и доводят объем водой до метки. Концентрацию галавита в надосадочной жидкости определяют из калибровочного графика (рисунок). Содержание галавита в разрабатываемом средстве в процентах (X) вычисляют по формуле:

Eqn86.wmf

где М – молярная масса галавита, г/моль; Vмк1 – объем мерной колбы 1, л; Vмк2 – объем мерной колбы 2, л; С – концентрация галавита в водном извлечении, моль/л; Vал – объем аликвоты, л; a – навеска мягкой лекарственной формы, г.

Для валидации методики готовили модельные смеси (№ 1–3), состоящие из субстанции галавита и кремнийсодержащего глицерогидрогеля, содержащие соответственно 80, 100 и 120 % определяемого компонента (аналитическая область определения), по отношению к их содержанию в разрабатываемом средстве, а также «плацебо», не содержащую субстанцию галавита.

Расчет метрологических характеристик и валидационную оценку методики количественного определения галавита проводили на пяти образцах каждой модельной смеси по показателям: специфичность, аналитическая область, линейность, правильность и прецизионность [1, 2, 4, 6, 11].

В табл. 1 приведены данные количественного определения галавита в модельных смесях (№ 1–3). Для каждой модельной смеси было проведено по 5 параллельных определений.

Результаты исследования и их обсуждение

В табл. 2 приведены данные статистической обработки результатов количественного определения галавита в модельных смесях.

Специфичность определяли на примере модельной смеси «плацебо» по методике, описанной выше. Во всех случаях отсутствовала полоса поглощения в области 297 нм, что подтверждает специфичность методики.

Таблица 1

Результаты количественного определения галавита в модельных смесях

Модельная смесь, №

Определяемый компонент, %

Заданное содержание галавита, мас. %

Фактическое содержание галавита, мас. %

1

80

0,56

0,55

0,56

0,56

0,56

0,57

2

100

0,70

0,68

0,69

0,69

0,71

0,72

3

120

0,84

0,82

0,82

0,83

0,85

0,85

Таблица 2

Данные статистической обработки результатов количественного определения галавита в модельных смесях

Метрологические характеристики

Модельная смесь, №

1

2

3

µ (истинное значение измеряемой величины), мас. %

0,56

0,70

0,84

Eqn87.wmf (среднее значение выборки), мас. %

0,56

0,69

0,83

s2 (дисперсия)

0,0001

0,0001

0,0001

s (стандартное отклонение), мас. %

0,0071

0,0084

0,0055

Eqn88.wmf (стандартное отклонение среднего результата), мас. %

0,0002

0,0038

0,0025

Eqn89.wmf (относительное стандартное отклонение среднего результата (коэффициент вариации)

0,01

0,54

0,30

∆х (значение доверительного интервала результата отдельного определения), мас. %

± 0,02

± 0,02

± 0,02

Eqn90.wmf (значение доверительного интервала среднего результата определения), мас. %

± 0,01

± 0,01

± 0,01

ε (относительная ошибка результата отдельного определения), %

3,52

3,35

1,83

Eqn91.wmf (относительная ошибка среднего результата определения), %

1,57

1,49

0,81

tвыч (95 %, 4) вычисленное значение критерия Стьюдента

0,01

0,53

1,63

Установлено, что в пределах аналитической области определения галавита наблюдается линейная зависимость определяемой величины, при этом расчетная величина коэффициента корреляции r отвечает условию |r| ≥ 0,99, и доверительные интервалы лежат в пределах 2 % относительно значения определяемой величины.

Для оценки правильности анализировали модельные смеси № 1–3, содержащие соответственно 80, 100 и 120 % определяемого компонента (галавита). Валидируемая методика может быть признана правильной, поскольку определяемые экспериментально значения лежат внутри доверительных интервалов, соответствующих средним результатам анализа. Рассчитанные значения tвыч. оказались меньше табличного (tтабл = 2,36 при Р = 95 %, f = 8), что позволяет с вероятностью 95 % сделать вывод об отсутствии значимой систематической ошибки.

Прецизионность оценивали на модельных смесях № 1–3 по величине стандартного отклонения результата отдельного определения и относительной ошибки результата отдельного определения. Установлено, что относительная ошибка не превышает 2,28 % от истинного значения измеряемой величины.

Метрологические характеристики методики количественного определения галавита в разрабатываемом средстве приведены в табл. 3.

Выводы

Разработана методика количественного определения галавита в мази на гидрофильной кремнийсодержащей основе методом УФ спектроскопии. Обоснованность методики подтверждена результатами определения таких валидационных характеристик как специфичность, аналитическая область, линейность, правильность и прецизионность. Разработанная методика может быть рекомендована для включения в нормативно-техническую документацию для контроля качества разрабатываемого средства.

Таблица 3

Метрологические характеристики методики количественного определения галавита в разрабатываемом средстве

μ

f

Eqn87.wmf

s2

s

Р

t(P, f)

∆х

ε

0,70

8

0,69

0,0001

0,0070

95

2,36

0,02

2,28

Рецензенты:

Петров А.Ю., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармации фармацевтического факультета, ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Екатеринбург;

Левит Г.Л., д.х.н., ведущий научный сотрудник, ФГБУН Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, г. Екатеринбург.

Работа поступила в редакцию 08.11.2013.


Библиографическая ссылка

Штанько И.Н., Хонина Т.Г. РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГАЛАВИТА В МЯГКОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ НА ГИДРОФИЛЬНОЙ КРЕМНИЙСОДЕРЖАЩЕЙ ОСНОВЕ // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10-11. – С. 2491-2494;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32821 (дата обращения: 18.11.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074