Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Вишнякова Ж.С. 1 Петрушова О.П. 1 Купрюшин А.С. 1

---

1 Пензенский Государственный Университет

Изучены активность ангиотензинпревращающего фермента и содержание оксида азота (II) в сыворотке крови новорожденных детей с диагнозом хроническая внутриутробная гипоксия плода и в сыворотке крови детей, рожденных от женщин с физиологическим течением беременности и родов. Обнаружено повышение активности ангиотензинпревращающего фермента и содержания оксида азота (II) в сыворотке крови новорожденных детей при хронической внутриутробной гипоксии плода по сравнению с нормой. Высказывается предположение, что ангиотензинпревращающий фермент участвует в патогенезе нарушений кровообращения, а NO – в развитии компенсаторной реакции у детей, развивавшихся в условиях дефицита кислорода. Увеличение активности фермента способствует снижению пониженного кровотока, а выделение NO является компенсаторной реакцией в ответ на вазоконстрикцию при хронической внутриутробной гипоксии плода.

Статья в формате PDF

288 KB

ангиотензинпревращающий фермент (АПФ)

оксид азота (II)

хроническая внутриутробная гипоксия плода

сыворотка крови

новорожденные дети

1. Андреева А.А. Продукция окиси азота и состояние центральной гемодинамики у новорожденных, здоровых и перенесших гипоксию // Педиатрия. – 2004. – № 1. – С. 3–4.

2. Бабак О.Я., Кравченко Н.А. Роль ренин-ангиотензиновой системы в ремоделировании сердца и сосудов // Украинский терапевтический журнал. – 2005. – № 2. – С. 26–28.

3. Бардинова Ж.С., Сметанин В.А., Петрушова О.П. Активность ангиотензинпревращающего фермента в сыворотке крови новорожденных при гестозах беременных // Естествознание и гуманизм. – 2010. – № 2. – С. 33–34.

4. Баркаган З.С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. – М.: Изд-во «Ньюдиамед», 2001. – 298 с.

5. Голиков П.П, Голиков А.П. Роль оксида азота в патологии // ТОП-медицина. – 1999. – № 5. – С. 35–41.

6. Голиков П.П., Николаева Н.Ю. Экспресс-метод определения активности ангиотензинпревращающего фермента в сыворотке крови // Клинич. лаб. диагностика. – 1998 . – № 1. – С. 11–14.

7. Ломакин М.С., Арцимович Н.Г. Биологически активные вещества, ассоциированные с плацентой // Акушерство и гинекология. – 1991. – № 9. – С. 6–10.

8. Преображенский Д.В., Сидоренко Б.А., Соколова Ю.В., Носова И.К. Физиология и фармакология ренин-ангиотензиновой системы // Кардиология. – 2007. – № 11. – С. 91–95.

9. Студеникин М.Я. Халлман Н. Гипоксия плода и новорожденного. – М.: Медицина, 2004 – 240 с.

Беременность – это сложный физиологический процесс, ход которого зависит от экологических, социальных, психологических и других факторов. Во время беременности обеспечиваются оптимальные условия для развития плода и течения родового акта, которые могут нарушаться в результате воздействия ряда неблагоприятных факторов.

В таких случаях одним из наиболее частых диагнозов, которые в последние годы ставят акушеры-гинекологи, является «фетоплацентарная недостаточность» (ФПН) [6].

ФПН рассматривают как клинический синдром, обусловленный морфофункциональными изменениями в плаценте и нарушениями компенсаторно-приспособительных механизмов, обеспечивающих функциональную полноценность органа. Синдром представляет собой результат сложной реакции плаценты на различные патологические состояния материнского организма и проявляется в комплексе нарушений транспортной, трофической, эндокринной и метаболической функций плаценты, лежащих в основе патологии плода и новорожденного [6].

Основными клиническими проявлениями хронической ФПН являются хроническая внутриутробная гипоксия плода (ХВГП) и его гипотрофия, или синдром задержки роста [8, 9]. Внутриутробная гипоксия плода оказывает негативное влияние на протекание периода новорожденности и на дальнейшее развитие ребенка. Она приводит к снижению адаптационных возможностей новорожденного и последующему замедлению темпов развития и поражению центральной нервной системы (возможны задержка развития речи, сложности в поведении, расторможенность, повышенная возбудимость, неусидчивость, плохая концентрация внимания) [9].

Известно, что в условиях кислородной недостаточности у плода наблюдается повышенный тонус периферических сосудов и активация вазоактивных факторов [6, 7]. В регуляции сосудистого тонуса и кровяного давления участвуют ангиотензин II, брадикинин и другие вещества. Изменение уровня биологически активных веществ определяется ферментами их обмена. Так, в образовании ангиотензина II и деградации брадикинина участвует ангиотензинпревращающий фермент (АПФ), который является компонентом ренин-ангиотензиновой системы (РАС). Вероятно, при различных осложнениях беременности и родов компоненты РАС участвуют в регуляции кровотока в системе мать-плацента-плод [3, 9].

Коррекция этих нарушений осуществляется с помощью компенсаторно-приспособительных реакций, к числу которых относится регуляция сосудистого тонуса и обеспечение нормального кровотока с участием оксида азота (II).

Поэтому целью настоящего исследования стало изучение роли изменения активности АПФ и содержания оксида азота (II) в сыворотке крови новорожденных при хронической внутриутробной гипоксии плода.

Материалы и методы исследования

Активность АПФ, количество оксида азота (II) определяли в сыворотке крови новорожденных, взятой из вены пуповины.

Образцы сыворотки крови исследовались у двух групп новорожденных: первая группа – дети, рожденные от женщин с физиологическим течением беременности и родов, вторая группа – дети с диагнозом ХВГП.

Активность АПФ определяли по образованию гли-арг из кбз-гли-гли-арг при рН 7,6 как активность, ингибируемую каптоприлом [1]. Препарат фермента (40 мкл) смешивали с 20 мкл 35 мкМ каптоприла в 100 мМ Трис-НСl буфере, рН 7,6, преинкубировали 8 мин при 37 °С. Реакцию начинали прибавлением 10 мкл раствора кбз-гли-гли-арг в вышеуказанном буфере (конечная концентрация в пробе 5 мМ). Через 60 мин реакцию останавливали прибавлением 30 мкл 10 % трихлоруксусной кислоты. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. Отбирали 50 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося гли-арг нингидриновым методом [2]. Пробы колориметрировали на КФК-2 при l = 590 нм. Активность ангиотензинпревращающего фермента определяли как разность в оптической плотности проб, не содержащих и содержащих каптоприл. Активность фермента выражали в нмоль гли-арг, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Белок определяли методом Лоури [4].

Содержание NО оценивали по количеству конечного стабильного метаболита оксида азота (II) – нитрит-иона. Суммарную концентрацию нитрит-иона определяли колориметрически по развитию окраски в реакции диазотирования нитритом сульфаниламида, входящего в состав реактива Грисса. 0,5 мл сыворотки крови смешивали с 1 мл 0,5 н раствора NaOH и 1мл 10 % раствора ZnSO4. Пробы центрифугировали 30 мин при 5000 об/мин. Затем 1 мл надосадочной жидкости инкубировали с 1 мл 1 % реактива Грисса в течение 20 мин при температуре 28 °С. Пробы колориметрировали на КФК-2 при λ = 540 нм. По калибровочному графику определяли концентрацию нитрит-аниона. Количество нитрит-иона выражали в мкг/мл.

Экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием t-критерия Стьюдента.

Корреляционный анализ проводили с помощью программы Статистика (версия 6.0).

Результаты исследования и их обсуждение

Согласно результатам исследования в сыворотке крови новорожденных детей с диагнозом хроническая внутриутробная гипоксия плода было отмечено достоверное увеличение активности АПФ в 2,3 раза по сравнению с детьми, рожденными от женщин с физиологическим течением беременности и родов (рис. 1).

Рис. 1. Активность АПФ в сыворотке крови новорожденных детей в норме и при ХВГП (нмоль продукта, образовавшегося за 1мин инкубации на 1 мг белка; ** – p < 0,01 относительно нормы)

При хронической внутриутробной гипоксии плода также было отмечено достоверное увеличение содержания NO в сыворотке крови новорожденных детей в 1,17 раза по отношению к норме (рис. 2).

ХВГП является следствием длительного пониженного маточно-плодово-плацентарного кровотока [9], регулируемого вазоактивными пептидами – ангиотензином II и брадикинином, содержание которых определяется активностью АПФ. Увеличение активности АПФ в 2,3 раза по сравнению с нормой может свидетельствовать об участии этого фермента в регуляции кровотока.

В условиях ХВГП у плода наблюдается повышенный тонус периферических сосудов, ухудшается кровообращение некоторых жизненно важных органов. В условиях пониженного кровотока происходит активация РАС, усиливается секреция ренина, который катализирует образование ангиотензина I. Увеличение количества ангиотензина I приводит к повышению активности АПФ и соответственно к увеличению количества ангиотензина II, обладающего вазоконстрикторным действием, что еще больше уменьшает пониженный кровоток и способствует усугублению патологического процесса. Это указывает на участие ангиотензинпревращающего фермента в патогенезе нарушений кровообращения.

При ХВГП в сыворотке крови новорожденных отмечено повышение содержания NО в 1,17 раза. Имеется тесная функциональная взаимосвязь между ангиотензином II и NО – фактором, расслабляющим сосуды. Известно, что ангиотензин II усиливает экспрессию NO-синтазы [5], что в свою очередь приводит к увеличению содержания NO, который обладает вазодилатирующим действием. NO поддерживает активную вазодилатацию, регулирует кровоток и тем самым контролирует базальное артериальное давление.

Рис. 2. Количество нитрит-аниона в сыворотке крови новорожденных в норме и при ХВГП (мкг/мл; *** – p < 0,001 относительно нормы)

Оксид азота (II) также синтезируется в ответ на механическое воздействие, оказываемое кровотоком на эндотелиальные клетки выстилки кровеносных сосудов, приводя к расширению сосудов [5].

Кроме того, обнаружена положительная корреляционная взаимосвязь между активностью АПФ и содержанием NО (КК = 0,71**), которая может свидетельствовать об участии последнего в компенсации пониженного кровотока у новорожденных в условиях гипоксии.

Таким образом, в патогенезе нарушений кровообращения при внутриутробной гипоксии важная роль принадлежит АПФ и оксиду азота (II), который участвует в компенсации пониженного кровотока. Возможно, полученные результаты могут быть использованы для коррекции нарушений кровотока, оказывающих негативное влияние на развитие новорожденного ребенка.

Рецензенты:

Микуляк Н.И., д.м.н., профессор, зав. кафедрой «Физиология человека» Медицинского института ПГУ, г. Пенза;

Моисеева И.Я., д.м.н., профессор, зав. кафедрой «Общая и клиническая фармакология» Медицинского института ПГУ, г. Пенза.

Работа поступила в редакцию 21.03.2014.

Библиографическая ссылка