Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

ЭНЗИМЫ ПУРИНОВОГО МЕТАБОЛИЗМА В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ ПРИ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА И ОСТЕОАРТРОЗА НА РАННИХ СТАДИЯХ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Зборовская И.А. 1 Мартемьянов В.Ф. 1 Бедина С.А. 1 Стажаров М.Ю. 1 Мозговая Е.Э. 1 Галаева О.Ю. 1
1 ФГБУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии» Российской академии медицинских наук
В лизатах лимфоцитов 55 больных ревматоидным артритом (РА) с длительностью болезни не более 1 года и 57 больных остеоартрозом (ОА) с длительностью болезни до 2 лет определены активности аденозиндезаминазы (АДА), АМФ-дезаминазы (АМФДА), адениндезаминазы (АД), 5´-нуклеотидазы (5´-НТ). Проведенные исследования показали, что у больных РА, по сравнению со здоровыми, в лизатах лимфоцитов выше активность АДА, АМФДА, 5´-НТ и ниже активность АД. У больных ОА в лизатах лимфоцитов выше активность АД. Выявлены определенные зависимости активности ферментов в лимфоцитах в зависимости от степени активности процесса у больных РА и от синовита у больных ОА. Сравнительные исследования показали, что у больных ОА, по сравнению с больными РА, в лимфоцитах ниже активность АДА, АМФДА, 5´-НТ и выше АД. Подобные энзимные различия в комплексе с клинико-инструментальными данными, учетом выхода активности ферментов за референтные пределы здоровых лиц, максимальных и минимальных величин активности ферментов способствуют дифференциации изученных нозологий на ранних стадиях болезни.
аденозиндезаминаза
АМФ-дезаминаза
адениндезаминаза
5´-нуклеотидаза
пуриновый метаболизм
лизаты лимфоцитов
ранний ревматоидный артрит
ранний остеоартроз
1. Болезни суставов: руководство для врачей / под ред. В.И. Мазурова. – СПб.: Спец.Лит, 2008. – С. 394–397.
2. Девятаева Н.М. Клинико-диагностическое значение исследование активности 5´-нуклеотидазы, АМФ-дезаминазы, адениндезаминазы, аденозиндезаминазы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных системной красной волчанкой: дис. … канд. мед. наук. – Волгоград, 2005. – 226 с.
3. Каратеев Д.Е., Олюнин Ю.А., Лучихина Е.Л. Новые классификационные критерии ревматоидного артрита ACR/EULAR 2010 – шаг вперед к ранней диагностике // Научно-практическая ревматология. – 2011. – № 1. – С. 10–15.
4. Ревматология: Клинические рекомендации / под ред. акад. РАМН Е.Л. Насонова. – 2-е изд., испр. и доп. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – С. 177–178.
5. Ревматология: Клинические рекомендации / под ред. Е.Л. Насонова, В.А. Насоновой. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. – С. 79–85.
6. Aletaha D., Neogi T., Silman A.J., Naden R.L., Felson D.T., Aggarwal R., et al. Rheumatoid arthritis classification criteria: An American College of Rheumatology // European League Against Rheumatism collaborative initiative // Ann. Rheum. Dis. – 2010. – № 69. – Р. 1580–1588.
7. Altman R., Alarson G., Appelrouth D. et al. The American College of Rheumatology criteria for the classification and reporting of osteoarthritis // Arthritis Rheum. – 1991. – Vol. 34. – P. 505–514.
8. Boyum A. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. – 1968. – Vol. 21. – Suppl. 97 (Paper IV) – P. 77–89.

Диагностика и дифференциальная диагностика ревматоидного артрита (РА), остеоартроза (ОА) в развернутых стадиях заболеваний в клинической практике не вызывает значительных затруднений. Но дифференциация этих заболеваний на ранних стадиях болезни с длительностью до 1–2 лет представляет определенные трудности даже для опытных врачей-ревматологов из-за схожести клинических проявлений заболеваний, малой значимости рентгенологических признаков поражений суставов и других параклинических данных. Актуальность проблемы не вызывает сомнений, так как в случае неправильного диагноза неадекватная терапия негативно отражается на течении болезни и ее исходе. На решение этой проблемы направлена наша работа, включающая в себя исследование активности некоторых ферментов пуринового метаболизма (ПМ): аденозиндезаминазы (АДА), АМФ-дезаминазы (АМФДА), адениндезаминазы (АД), 5′-нуклеотидазы (5′-НТ) в лизатах лимфоцитов больных РА с длительностью болезни до 1 года и больных ОА с длительностью болезни до 2 лет.

Цель исследования – изучить активность АДА, АМФДА, АД и 5′-НТ в лизатах лимфоцитов больных РА с длительностью болезни до 1 года и больных ОА с длительностью болезни до 2 лет в зависимости от клинических особенностей заболеваний и выявить энзимные различия крови, способствующие дифференциации РА и ОА на ранних стадиях заболеваний.

Материал и методы исследований

Под наблюдением находились 112 больных, из которых 55 больных РА с длительностью болезни до 1 года и 57 больных ОА с длительностью болезни до 2 лет. В дальнейшем группа больных РА будет именоваться как больные с ранним ревматоидным артритом (РРА), а больные ОА – как больные с ранним ОА (РОА). Контингент больных РРА был представлен 40 (72,7 %) женщинами и 15 (27,3 %) мужчинами. Средний возраст больных (М ± m) – 48,1 ± 0,4 года, длительность болезни – 5,4 ± 0,4 месяца. Диагностика РРА проводилась на основании диагностических критериев Американской коллегии ревматологов (ACR) и Европейской антиревматической лиги (EULAR), исходя из 10-балльной системы, где для постановки диагноза требуется не менее 6 баллов [6, 3]. Главными критериями включения больных в исследование были: информированное согласие, возраст 19–65 лет, наличие не менее 6 баллов по критериям, предложенным ACR/EULAR [3], длительность болезни не менее 12 месяцев, не менее чем I стадия поражения суставов по Штейнброккеру [1]. В исследование не входили больные с сопутствующими внутренними болезнями, недифференцированным артритом, злокачественными новообразованиями, лица, злоупотребляющие алкоголем. Активность ревматоидного процесса оценивалась по индексу DAS-28, рекомендованному EULAR и Ассоциацией ревматологов России [4]. I степень активности процесса определялась у 12 (21,8 %) больных, II степень – у 25 (45,5 %) и III степень – у 18 (32,7 %) больных. I стадия поражения суставов установлена у 36 (65,5 %) больных, II стадия – у 19 (34,5 %). Системные поражения выявлены у 6 (10,9 %) больных, полиартрит – у 43 (78,2 %) больных.

Контингент больных РОА был представлен 57 больными, из которых 41 (71,9 %) женщина и 16 (28,1 %) мужчин. Диагностика ОА проводилась на основании диагностических критериев ACR [7]. Средний возраст больных – 46,3 ± 0,5 лет, длительность болезни по амнестическим данным – 10,9 ± 0,6 месяцев. В исследование включались больные в возрасте 35–65 лет без тяжелых сопутствующих заболеваний внутренних органов. I стадия поражения суставов по Келлегрену - Лоуренсу [5] определялась у 45 (78,9 %) больных, II стадия – у 12 (21,1 %). Явления синовита клинически были выражены у 35 (61,4 %) больных. Контрольную группу составили 30 практически здоровых людей.

Выделение лимфоцитов и лимфоцитов из венозной крови проводилось по методике Boyum (1980) с использованием лимфосепа в градиенте плотности 1,075–1077 г/л [8]. Определение активности АДА, АМФДА, АД проводилось спектрофотометрически по оригинальным методикам по количеству аммиака (азота), высвобождающегося в ходе катализируемых реакций, а активность 5′-НТ – по количеству неорганического фосфора [2]. Активность энзимов в лизатах лимфоцитов выражали в нмоль/мин/мл, содержащей 1×107 клеток (до лизиса).

Статистический анализ результатов проводился с использованием пакета программ «Statistica 6.0». При сравнении независимых групп использовались параметрические (критерий Стьюдента) и непараметрические (критерий Манна – Уитни, Вальда – Вольфовица) методы, зависимых групп – критерии Стьюдента и Вилкоксона. Различия считались достоверными при р < 0,05.

Результаты исследований и их обсуждение

Статистически значимых различий энзимной активности в лизатах лимфоцитов здоровых людей в зависимости от пола и возраста выявлено не было, и поэтому исследования у больных РОА и РРА проводились без учета этих факторов.

У больных РРА (всей группы), по сравнению со здоровыми, в лизатах лимфоцитов (таблица) выше активность АДА, АМФДА, 5′-НТ и ниже активность АД (все р < 0,001) Учитывая возможное влияние активности процесса на ферментные показатели крови, нами были проведены исследования активности ферментов у больных РРА с различной степенью активности процесса. По сравнению со здоровыми, у больных РРА с I степенью активности процесса в лизатах лимфоцитов выше активность АДА, 5′-НТ и ниже АД (все р < 0,001), у больных РРА с II степенью в лизатах лимфоцитов выше активность АДА, АМФДА, 5′-НТ и ниже АД (все р < 0,001); у больных РРА с III степенью в лимфоцитах выше активность АМФДА (р < 0,001), АД (р < 0,05), 5′-НТ (р < 0,001).

Анализ показал, что чем выше степень активности у больных РРА, тем в лимфоцитах выше активность АМФДА, 5′-НТ и ниже АДА. Между всеми степенями активности процесса выявлены статистически значимые энзимные различия. Наличие системности поражений, ревматоидного фактора, тяжелой стадии поражения суставов обуславливают в лимфоцитах более низкую активность АДА и более высокую – АМФДА, 5′-НТ и АД.

У больных РОА (всей группы), по сравнению со здоровыми, в лизатах лимфоцитов выше активность АД (р <0,001). По сравнению со здоровыми, у больных РОА с синовитом в лизатах лимфоцитов выше активность 5′-НТ (р = 0,006), АД (р < 0,001); у больных РОА без синовита активность всех ферментов не имеет статистически значимых различий (р > 0,05). Сравнительный анализ показал, что у больных РОА (всей группы), по сравнению с больными РРА (всей группы), в лимфоцитах (таблица) ниже активность АДА, АМФДА, 5′-НТ и выше – АД (все р < 0,001). Но, учитывая существенное влияние на ферментные показатели при РРА активности процесса, а при РОА – наличие синовита, мы провели сравнительные исследования с учетом этих факторов. Так, у больных РОА с синовитом, по сравнению с больными РРА с I степенью, в лимфоцитах ниже активность АДА (р < 0,001), 5′-НТ (р = 0,032), выше АД (р < 0,001); по сравнению с больными РРА с II степенью, в лимфоцитах ниже активность АДА, АМФДА, 5′-НТ и выше активность АД (все р < 0,001); по сравнению с больными РРА с III степенью, в лимфоцитах выше активность АДА, ниже АМФДА, АД, 5′-НТ (все р < 0,001). У больных РОА с синовитом, по сравнению с больными РРА (всей группы), в лимфоцитах ниже активность АДА, АМФДА, 5′-НТ (все р < 0,001). У больных РОА без синовита, по сравнению с больными РРА (всей группы), в лимфоцитах ниже активность АДА (р = 0,003), АМФДА (р < 0,001), 5′-НТ (р < 0,001) и выше АД (р < 0,001).

Таблица 1

Активность ферментов в лизатах лимфоцитов больных РРА и РОА

Контингент

Кол-во больных

Стат. показатели

АДА

АМФДА

АД

5′-НТ

Больные РРА (вся группа)

55

M

σ

m

Мин-Макс

53,0

8,52

1,15

34,3-64,7

3,68

0,25

0,03

3,2-4,2

1,65

0,34

0,05

1,22-2,32

42,7

3,24

0,44

37,5-50,1

РРА – I степень активности

12

M

σ

m

55,8

2,70

0,78

3,44

0,13

0,04

1,52

0,12

0,03

39,6

1,17

0,34

РРА – II степень активности

25

M

σ

m

58,8

2,88

0,58

3,60

0,12

0,02

1,39

0,12

0,03

42,6

2,80

0,56

РРА – III степень активности

18

M

σ

m

43,1

7,47

1,76

3,96

0,18

0,04

2,09

0,10

0,02

44,8

3,17

0,75

Больные РОА (вся группа)

57

M

σ

m

Мин-Макс

47,5

1,53

0,20

43,8-50,9

3,26

0,18

0,02

3,0-3,7

2,27

0,26

0,03

1,72-2,66

37,3

1,70

0,23

34,0-42,0

Больные РОА с синовитом

35

M

σ

m

48,0

1,57

0,27

3,33

0,19

0,03

2,43

0,12

0,02

37,8

1,75

0,30

Больные РОА без синовита

22

M

σ

m

46,8

1,13

0,24

3,15

0,12

0,03

2,00

0,18

0,04

36,6

1,34

0,28

Здоровые

30

M

σ

m

M-2σ

M + 2σ

46,4

4,68

0,85

37,0

55,8

3,24

0,49

0,09

2,26

4,22

1,95

0,26

0,05

1,43

2,47

36,6

1,63

0,30

33,3

39,9

Таким образом, проведенные исследования выявили достаточно много энзимных различий между больными РРА и РОА с учетом и без учета клинических особенностей заболеваний. Однако среднестатистические величины дают лишь общее представление об изменениях активности ферментов – на основании их трудно дифференцировать заболевания у конкретного больного. Проблему несколько облегчает ориентировка на показатели активности, выходящие за референтные величины (М ± 2σ) здоровых людей. Так, у больных РРА в лимфоцитах за верхние референтные пределы (условную норму) выходят показатели активности АДА в 63,3 % случаев, 5′-НТ в 74,5 %, за нижние – АД в 40 % случаев. У больных РОА в лимфоцитах за верхние границы выходят только показатели активности АД в 40 % случаев, 5′-НТ в 10,5 %. Дифференциально-диагностический комплекс энзимных различий нозологий существенно может дополнить учет максимальных и минимальных величин активности ферментов, полученных нами в результате исследований (табл. 2).

Результаты проведенных исследований показали, что на ранних стадиях РА и ОА, помимо общих клинических проявлений, особенно при нетипичном развитии заболеваний, имеется и много общего в изменениях активности ферментов пуринового метаболизма. Как при РРА, так и при РОА активность изученных ферментов в большинстве случаев меняется в одном направлении – в сторону повышения. При РРА изменения активности в количественном аспекте выраженнее, чем при РОА; исключением стала лишь активность АД в лимфоцитах у больных РРА, где в 40 % случаях она оказалась ниже, а у больных РОА – выше (28,1 %), чем у здоровых (р < 0,001). Объяснить подобную ситуацию можно патогенетическими особенностями рассматриваемых заболеваний: если при РА в патогенезе принимают участие иммунные, воспалительные и, в меньшей степени, дегенеративные процессы, то при ОА патогенетические механизмы включают в себя метаболические нарушения в первую очередь, во-вторую – воспалительные процессы и, возможно, иммунные нарушения (выраженность которых значительно меньше, чем при РА). Учитывая, что ферменты – весьма чувствительный индикатор метаболических процессов, можно понять причины более выраженных энзимных изменений при РА по сравнению с ОА. Выявленные энзимные различия можно использовать в дифференциации РРА и РОА только в случаях исключения иных ревматических заболеваний суставов. Таким образом, анализируя результаты исследований, учитывая выход показателей активности за референтные пределы здоровых людей, максимальные и минимальные величины, за диагноз РРА будут свидетельствовать: в лизатах лимфоцитов – выход за верхние границы условной нормы (М ± 2σ) показателей активности АДА и/или 5′-НТ, за нижние границы активности АД и/или активность АДА выше 51 нмоль/мин/мл, АМФДА выше 3,7 нмоль/мин/мл, 5′-НТ (выше 42 нмоль/мин/мл), активность АД ниже 1,7 нмоль/мин/мл.

Таблица 2

Выход за референтные пределы (в %) активности энзимов в лимфоцитах больных РРА и РОА, минимальные и максимальные величины активности энзимов

Контингент

Энзимы

Выход за верхние границы, M + 2σ(%)

Выход за нижние границы, M – 2σ (%)

Минимальные величины активности энзимов, нмоль/мин/мл

Максимальные величины активности энзимов, нмоль/мин/мл

Больные РРА (55)

АДА

АМФДА

АД

5′-НТ

63,6

74,5

40

34,3

3,2

1,22

37,5

64,7

4,2

2,32

50,1

Больные РОА (57)

АДА

АМФДА

АД

5′-НТ

28,1

10,5

43,8

3,0

1,72

34,0

50,9

3,7

2,66

42,0

За диагноз РОА будут свидетельствовать следующие данные. В лизатах лимфоцитов – показатели активности АДА, АМФДА в пределах условной нормы, выход за верхние границы нормы активности АД и/или активность АМФДА ниже 3,2 нмоль/мин/мл, 5′-НТ ниже 37,5 нмоль/мин/мл, АД выше 2,32 нмоль/мин/мл. Для дифференциации РРА и РОА необязателен весь комплекс изменений энзимной активности, характерный для того или иного заболевания – достаточно 2–3 показателей в комплексе с клинико-инструментальными данными. Но все-таки чем больше выявленных энзимных различий, свойственных РРА и РОА, тем выше степень достоверности диагноза заболевания.

Выводы

1. У больных с ранним остеоартрозом, по сравнению с больными ранним ревматоидным артритом, в лизатах лимфоцитов ниже активность АДА, АМФДА, 5′-НТ и выше активность АД.

2. При дифференциации РРА и РОА целесообразно ориентироваться на величины активности ферментов, выходящих за референтные пределы здоровых лиц и на максимальные и минимальные величины активности ферментов, полученных нами у больных в процессе исследований.

Рецензенты:

Александров А.В., д.м.н., зав. лабораторией функциональных методов исследования, ультразвуковой диагностики и восстановительной терапии, ФГБУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии» Российской академии медицинских наук, г. Волгоград;

Заводовский Б.В., д.м.н., профессор, зав. лабораторией методов лечения и профилактики заболеваний суставов, ФГБУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии» Российской академии медицинских наук, г. Волгоград.

Работа поступила в редакцию 11.09.2014.


Библиографическая ссылка

Зборовская И.А., Мартемьянов В.Ф., Бедина С.А., Стажаров М.Ю., Мозговая Е.Э., Галаева О.Ю. ЭНЗИМЫ ПУРИНОВОГО МЕТАБОЛИЗМА В ЛИМФОЦИТАХ КРОВИ ПРИ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА И ОСТЕОАРТРОЗА НА РАННИХ СТАДИЯХ ЗАБОЛЕВАНИЯ // Фундаментальные исследования. – 2014. – № 10-2. – С. 279-283;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=35332 (дата обращения: 10.12.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074