До настоящего времени в изучении физиологии размножения сельскохозяйственных животных остаются мало выясненными вопросы корреляции и взаимодействия всех систем организма в различные периоды репродуктивного процесса. Изучение закономерностей репродукции животных на основе современных методик, выяснение взаимосвязи отдельных интерьерных показателей при размножении дает возможность расширить наши знание в этой области биологической науки.
Известно, что у самок стадии полового цикла сопровождаются комплексом морфологических и биохимических «сдвигов», которые наиболее отчетливо проявляются со стороны эндометрия. Именно в нем происходят характерные изменения, отражающие функциональную активность гипоталамо - гипофизарно - гонадной системы, обеспечивающей регуляцию полового цикла. Посредством этих физиологических изменений половой аппарат самки подготавливается к восприятию оплодотворяемой яйцеклетки. В то же время возникновение даже незначительных патологических нарушений в эндометрии может стать препятствием для оплодотворения яйцеклетки и имплантации зиготы.
Одним из факторов, вызывающих нарушения функциональной активности эндометрия, являются воспалительные процессы, которые сопровождаются не только морфо - функциональными, но и биохимическими изменениями в тканях матки.
В настоящее время отечественными и зарубежными исследователями накоплено достаточное количество данных об этиологии и патогенезе послеродовых заболеваний у свиноматок, в том числе и послеродовых эндометритов. Однако сведения о содержании нуклеиновых кислот в тканях эндометрия в динамике полового цикла при воспалительных процессах в матке свиноматок немногочисленны и во многих случаях противоречивы.
Учитывая актуальность обозначенной проблемы, целью настоящей работы являлось изучение содержания нуклеиновых кислот и скорости их аутолиза в эндометрии свиноматок в норме и при остром воспалительном процессе.
Экспериментальную часть работы проводили в условиях научно-исследовательской лаборатории кафедры терапии и акушерства Курской государственной сельскохозяйственной академии, учебно-опытного хозяйства Курской ГСХА и подсобного хозяйства Курской атомной станции.
Объектом исследований являлись свиноматки крупной белой породы. Животные подбирались по принципу аналогов с учетом возраста, стадии полового цикла и характера воспалительного процесса.
В опытах использовали животных от шестимесячного до двухлетнего возраста. Свиноматки содержались в типовых свинарниках в соответствии с зоогигиеническими требованиями. Материалом для исследования служили матки свиноматок, которые отбирались при убое в убойном цехе свинокомплекса подсобного хозяйства Курской АЭС. При осмотре половых органов устанавливали стадии полового цикла (по состоянию яичников) и характер воспалительного процесса. Из рогов матки отбирали маточное содержимое для бактериологической оценки, фрагменты стенки матки с целью проведения гистологического и гистохимического анализов для биохимических исследований использовали навеки эндометрия по 100 мг.
В ходе выполнения работы применяли комплекс методов. Гистологические исследования проводили по общепринятой схеме: фиксация материала в жидкости Карнуа, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации и ксилоле, заливка в парафин, приготовление парафиновых срезов. Окрашивание препарата гематоксилин - эозином. При микрокопировании препаратов применяли окуляр-микрометр для измерения гистологических объектов.
Для гистохимического анализа использовали метод раздельного выявления ДНК и РНК: готовили парафиновые срезы по указанной выше схеме, часть из них (контроль) помещали в растворы ДНК-азы и РНК-азы на 1 час при 37˚С. Опытные и контрольные срезы окрашивали смесью двух основных красителей - метиловым зеленым и пиронином по Браше.
Количественное содержание РНК и ДНК в навеке слизистой оболочки матки устанавливали методом двухволновой спектрофотометрии в УФ спектре (Шмидт, Тангаузер, 1958). Расчет количества нуклеиновых кислот проводили по формуле, предложенной Спириным.
Активность нуклеаз (дезоксирибонуклеазы и рибонуклеазы) определяли опосредованно по уменьшению содержания нуклеиновых кислот в гомогенате эндометрия в процессе инкубирования в 0,2 М натрий-ацетатном буфере при рН 5,2. Полученные в ходе выполнения работы данные подвергались биометрической обработке на ПЭВМ с использованием прикладных программ.
Сравнительный анализ содержания нуклеиновых кислот в тканях эндометрия свиноматок от 6- до 24-месячного возраста показал, что их уровень не остается постоянным (рис. 1). В отношении ДНК, нами отмечено наибольшее ее содержание в эндометрии свиноматок 6-8-месячного возраста (38,62±0,92 - 42,82±1,34 мкг Р), у животных 9-месячного возраста и старше количество ДНК находилось примерно на одинаковом уровне (30,81±0,79 - 32,29±0,74 мкг Р).
Рисунок 1. Содержание РНК и ДНК в эндометрии свиноматок разного возраста
У свинок 6-месячного возраста регистрировалось наибольшее количество РНК в тканях эндометрии (111,96±1,34 мкг Р). В эндометрии 9- и 15-месячных свиноматок содержание этой нуклеиновой кислоты снижалось и составляло соответственно 104,82±2,11 и 97,82±3,29 мкг Р. В 18 месяцев отмечено возрастание количества РНК в эндометрии до 102,34±1,79 мкг Р, а в последующие периоды снижение до 84,47±1,65 мкг Р.
Известно, что в течение полового цикла в эндометрии самок происходят как пролиферативные, так и биохимические «сдвиги». Определенные изменения были выявлены нами со стороны содержания нуклеиновых кислот (рис. 2). Так, в стадии возбуждения полового цикла отмечался максимальный уровень РНК - 109,54±2,83 мкг Р. В стадии торможения количество РНК достоверно снижалось (Р<0,05) и составляло 96,72±3,04 мкг Р, а во время стадии уравновешивания вновь повышалось на 6,12±0,31 мкг Р.
Рисунок 2. Содержание ДНК, РНК в эндометрии свиноматок в динамике полового цикла
Колебания количества ДНК в эндометрии в стадии возбуждения и торможения полового цикла были недостоверными (Р<0,05), находились практически на одинаковом уровне с незначительным увеличением в стадии возбуждения (41,46±1,58 мкг Р). В стадии уравновешивания содержание ДНК достигало минимального значения - 36,54±0,66 мкг Р (Р<0,05).
Результаты сравнительного анализа содержания нуклеиновых кислот в эндометрии свиноматок свидетельствуют о том, что в период стадии возбуждения уровень ДНК в эндометрии больных свиноматок составлял 38,69±2,04 мкг Р, а в стадии торможения и уравновешивания он снижался соответственно до 37,15±0,38 и 35,29±0,91 мкг Р. При этом у здоровых животных содержание ДНК в соответствующие периоды было достоверно (Р<0,05) выше (36,54±0,66 мг - 41,46±1,58 мкг Р), чем у больных свиноматок.
Что касается РНК, то ее содержание в эндометрии больных животных колебалось в пределах 86,47±3,17 - 93,64±3,02 мкг Р, что относительно здоровых свиноматок (96,72±3,04 - 109,54±2,83 мкг Р) было достоверно ниже (Р<0,05).
Проведенные нами гистологические исследования также подтвердили, что содержание нуклеиновых кислот в эндометрии свиноматок не остается постоянным как в период половой цикличности, так и при воспалительном процессе. Так, для стадии возбуждения полового цикла характерным являлось повышение концентрации РНК в цитоплазме клеток эпителия и выраженное «скопление» ДНК в их ядрах. В стадии торможения и уравновешивания концентрация нуклеиновых кислот, особенно РНК, в цитоплазме клеток железистого эпителия снижалась.
В эндометрии свиноматок больных острым послеродовым эндометритом при гистохимическом исследовании была выявлена высокая концентрация РНК в эндотелиальных клетках капилляров, а в эпителии эндометрия отмечалась неравномерная зернистость ДНК эпителиоцитов и низкое содержание РНК в цитоплазме клеток.
Результаты исследования аутолиза нуклеиновых кислот показали, что в стадии торможения полового цикла уровень аутолиза ДНК достигал максимального значения (0,225±0,056 мкг Р/ч), в стадии уравновешивания скорость аутолиза снижалась до 0,164±0,03 мкг Р/ч, а в стадии возбуждения составляла 0,132±0,012 мкг Р/ч.
Аутолиз РНК имел аналогичную динамику изменения в ходе полового цикла, однако он был более выраженным. Так, наибольшая скорость аутолиза РНК отмечалась в стадии торможения - 8,48±0,14 мкг Р/ч, а в стадии уравновешивания и возбуждения она снижалась соответственно до 7,04±0,13 и 6,79±0,16 мкг Р/ч.
В ходе проведенных исследований было установлено, что интенсивность аутолиза нуклеиновых кислот в эндометрии больных свиноматок была выше, чем у здоровых животных. Так, в стадии возбуждения скорость аутолиза ДНК составляла 0,247±0,021 мкг Р/ч. Во время стадии торможения она была максимальной (0,395 ± 0,053 мкг Р/ч), а в период стадии уравновешивания вновь уменьшалась, достигая 0,293±0,046 мкг Р/ч.
Интенсивность аутолиза РНК в период исследований находилась в пределах 8,11±0,61 - 9,68±0,38 мкг Р/ч. При этом максимального значения скорость аутолиза достигала в стадии торможения, а минимального - в стадии возбуждения.
Таким образом результаты наших исследований содержания нуклеиновых кислот и скорости их аутолиза в эндометрии свиноматок в динамике полового цикла и при остром послеродовом эндометрите расширяют и конкретизируют существующие представления о системности функционально-морфологических перестроек в репродуктивных органах самок в период половой цикличности и при воспалительных процессах. Выявленные выявленные интерьерные показатели могут быть использованы в целенаправленной работе при изыскании новых средств борьбы с эндометритами у свиноматок.
С использованием биохимических и гистохимических исследований получены новые данные о содержании и распределении в тканях эндометрия свиноматок ДНК и РНК в различные стадии полового цикла и при остром эндометрите. Установлено, что скорость аутолиза нуклеиновых кислот в эндометрии свиноматок изменяется в зависимости от стадии полового цикла и наличия воспалительного процесса.
Библиографическая ссылка
Сеин О.Б., Трубников Д.В., Меринова М.В. СОДЕРЖАНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ В ЭНДОМЕТРИИ СВИНОМАТОК В НОРМЕ И ПРИ ОСТРОМ ВОСПАЛИТЕЛЬНОМ ПРОЦЕССЕ // Фундаментальные исследования. – 2006. – № 3. – С. 18-20;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=4840 (дата обращения: 25.04.2024).