Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИНГИБИНА-В СПЕРМОПЛАЗМЫ ЧЕЛОВЕКА

Николаев А. А., Луцкая А. М., Николаев А. А., Луцкий Д. Л., Думченко В. В.

Ингибин - относится к цитокинам, его молекулярная масса составляет 32 кDa. У мужчин физиологически значимым является ингибин-В. Ингибин-B состоит из α- и β-В-cубъединиц, связанных дисульфидными мостиками.

Ингибин селективно ингибирует освобождение ФСГ из передней доли гипофиза и обладает паракринным действием в гонадах. Концентрация ингибина-В у мужчин обратно пропорционально коррелирует с концентрацией ФСГ, являясь отрицательным эндокринным модулятором ФСГ.

Клиническими исследованиями установлено, что ингибин-В - более ценный маркер гаметогенеза по сравнению с гипофизарным ФСГ поскольку он является прямым маркёром гаметогенеза. Уровень ингибина-В непосредственно отражает функциональное состояние тестикул у мужчин, соответственно, сниженные уровни ингибина-В показывают снижение функции гонад.

Целью нашей работы стало выделение и иммунохимическая идентификация спермоплазменного ингибина-В.

Зная, что ингибин-В имеет сравнительно небольшую молекулярную массу, и его электрофоретическая подвижность лежит в области преальбуминов, мы предприняли попытку выделения этого белка из спермоплазмы сочетанием хроматографических и электрофоретических методов.

Для первичной очисти препарата спермоплазмы от низкомолекулярных балластных фракций была использована гельпроникающая хроматография на сефадексе G-75. Для выделения ингибина-В препарат спермоплазмы подвергали гельпроникающей хроматографии на сефадексе G-75 на колонке 2´90 см, оставляя фракции соответствующие молекулярной массе от 40 до 20 кДа, после диализа провели лиофилизацию полученных фракций. Циклы гельпроникающей хроматографии на сефадексе G-75 повторяли многократно до накопления 500 мг препарата белка.

Дальнейшую очистку проводили методом ионообменной хроматографии на колонке 2,5´85 см с анионообменником ДЕАЕ-тойоперл. Для идентификации полученных фракций использовали диск-электрофорез в ПААГ.

Полученный после лиофилизации препарат белка использовали для иммунизации кролика. Первый цикл иммунизации проводили внутримышечными инъекциями (8 инъекций через 1 день с возрастающей концентрацией белка), реиммунизацию проводили субконъюнктивальными инъекциями (4 инъекций по 2 подряд, затем 3 дня перерыв и еще 2 инъекции). После 3 циклов реиммунизации у кролика брали кровь для получения гипериммунной антисыворотки.

Для получения моноспецифической антисыворотки абсорбцию лиофильно высушенной плазмой крови человека и иммуносорбентами, приготовленными полимеризацией глутаровым альдегидом сыворотки крови и экстрактов органов (почка, печень, селезенка, сердце, легкое, мозг). Гетерологические антитела абсорбировали, смешивая с равным объемом геля и инкубируя при 37°С в течении 2 часов. После центрифугирования полноту истощения контролировали в реакции иммунодиффузии. Полученную таким образом моноспецифическую антисыворотку использовали для конструирования тест-системы.

Для контроля специфичности полученной тест-системы использовали коммерческий препарат ингибина-В (фирма «DSL»), который в иммуноэлектрофорезе и двойной встречной иммунодиффузии показал полную идентичность полученному нами белку.


Библиографическая ссылка

Николаев А. А., Луцкая А. М., Николаев А. А., Луцкий Д. Л., Думченко В. В. ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИНГИБИНА-В СПЕРМОПЛАЗМЫ ЧЕЛОВЕКА // Фундаментальные исследования. – 2005. – № 2. – С. 29-30;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=5700 (дата обращения: 10.12.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074