Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Агаркова Т.А. 1

---

1 ФБГУ «НИИАГП» СО РАМН

Проведено клиническое и молекулярно-генетическое обследование 145 больных с генитальным эндометриозом, страдающих бесплодием. Зарегистрировано, что распределение аллельных вариантов полиморфизма гена TGFВ среди пациенток с эндометриоз-ассоциированным бесплодием характеризуется преобладанием генотипа СС и аллеля С полиморфизма С-509Т гена TGFВ. Выявлена положительная ассоциация эндометриоз-ассоциированного бесплодия с аллелем Т и генотипом ТТ полиморфизма С-509Т гена TGFВ. В результате исследования нами была установлена ассоциация генотипов полиморфизма С-509Т гена TGFВ со спаечным процессом органов малого таза различной степени тяжести. Установлено, что у носителей генотипа ТТ локуса С-509Т гена TGFВ был выявлен спаечный процесс органов малого таза, в тоже время у носителей генотипа СС он отсутствовал.

Статья в формате PDF

272 KB

бесплодие

генитальный эндометриоз

полиморфизм генов цитокинов

трансформирующий фактор роста-бета

спаечный процесс органов малого таза

1. Герасимов А.М. Причины бесплодия при наружном эндометриозе // Российский вестник акушера-гинеколога. – 2008. – № 1. – С. 31–35.

2. Корсак В.С. Эндометриоз и ВРТ / В.С. Корсак, О.Е. Васильева, Э.В. Исакова // Проблемы репродукции. – 2006. – № 3.– С. 41–46.

3. Овсянникова Т.В. Эпидемиология бесплодного брака // Практическая гинекология / под ред. В.И. Кулакова, B.Н. Прилепской. – М., 2001. – С. 336–382.

4. Bunting L. Fertility knowledge and beliefs about fertility treatment: findings from the International Fertility Decision-making Study [Electronic resource] / L. Bunting, I. Tsibulsky, J. Boivin // Hum. Reprod. – 2012. – URL: http://humrep.oxfordjournals.org/content/early/2012/11/25/humrep.des402.long.

5. Guo S.W. Nuclear Factor-kappaB (NF-kappaB): An Unsuspected Major culprit in the Pathogenesis of Endometriosis That Is Still at Large? // Gynecol. Obstet. Invest. – 2006. – Vol. 63. – P. 71–97.

6. Iwabe T., Harada T., Terakawa N. Role of cytokines in endometriosis-associated infertility// Gynec. Obstet. Invest. – 2002. – Vol. 53, № 1. – Р. 19–25.

7. Kamath M.S. Demographics of infertility and management of unexplained infertility / M.S. Kamath, S. Bhattacharya // Best Pract. Res. Clin. Obstet. Gynaecol. – 2012. – Vol. 26. – P. 729–738.

8. McLaren J.F. Infertility evaluation // Obstet. Gynecol. Clin. North Am. – 2012. – Vol. 39. – P. 453–463.

9. Schmidt L. The psychosocial consequences of infertility and fertility treatment / L. Schmidt, C.S. Sejbæk // Ugeskr Laeger. – 2012. – Vol. 174. – P. 2459–2462.

10. Senapati S. Managing endometriosis-associated infertility / S. Senapati, K. Barnhart // Clin. Obstet. Gynecol. – 2011. – Vol. 54. – Р. 720–726.

Бесплодие является актуальной проблемой современного общества. Прогрессирующее ухудшение репродуктивного здоровья и демографической ситуации в стране позволяют признать проблему фертильности одним из приоритетных клинических и социальных направлений. Медицинская значимость женского бесплодия определяется необходимостью решения ряда вопросов, связанных со своевременной и правильной диагностикой, повышением эффективности его лечения и профилактики [3, 4, 9].

Установлено, что частота бесплодия, превышающая 15 %, значительно влияет на демографические показатели, превосходя суммарное воздействие на численность населения невынашивания беременности и перинатальной патологии [3, 7, 8]. Частота бесплодных браков колеблется в широких пределах и не имеет тенденции к снижению во многих странах мира.

Эндометриоз в большинстве случаев сопровождает бесплодие. Наиболее спорными являются причины развития бесплодия при наружном генитальном эндометриозе, а также патогенетическая связь этих двух состояний. Несмотря на длительную историю изучения эндометриоза, многие стороны этиологии и патогенеза этой болезни остаются на уровне гипотез [5]. Однако до настоящего времени не выработано единой точки зрения на причины развития бесплодия при наружном генитальном эндометриозе [10].

Одной из очевидных причин бесплодия при эндометриозе является «механический фактор», обусловленный развитием спаечно-рубцового процесса в области малого таза, что приводит к нарушению нормальных анатомо-функциональных взаимоотношений между яичником и маточной трубой, вызывает нарушение транспортной функции и проходимости маточных труб [1, 2]. Известно, что ТGF-β является противовоспалительным цитокином и участвует в процессах воспаления, тканеобразования, репарации, усиливает рост фибробластов и синтез коллагена, обладает иммуносупрессивным и противовоспалительным действием. При развитии патологии TGF-β является основным медиатором формирования фиброза, с чем связывают возможную роль цитокина в патогенезе эндометриоза [6].

В связи с этим целью настоящего исследования явился анализ функционального полиморфизма гена TGFВ при эндометриоз-ассоциированном бесплодии.

Материал и методы исследования

В исследовании приняли участие 236 пациенток репродуктивного возраста от 25 до 40 лет (средний возраст 30,22 ± 0,28 года), которые были госпитализированы в гинекологическую клинику ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России и в гинекологическое отделение ФГБУ «НИИАГП» СО РАМН в 2010–2012 гг. для выполнения лечебно-диагностической и оперативной лапароскопии и гистероскопии. Показанием к оперативному вмешательству явилось бесплодие. Основную группу составили 145 пациенток с эндометриозом, страдающие бесплодием. Диагноз эндометриоза был поставлен в результате осмотра брюшины и органов малого таза на наличие эндометриоидных очагов в ходе эндоскопических методов исследования с последующим гистологическим подтверждением. Группа сравнения была сформирована из 91 пациентки с бесплодием, которым была выполнена диагностическая лапароскопия и исключен генитальный эндометриоз. Лапароскопию и гистероскопию выполняли по стандартной методике с использованием аппаратуры фирмы «KarlStorz» (Германия).

У всех женщин было получено добровольное информированное согласие на забор и использование крови для проведения исследований. Кровь для молекулярно-генетических методов исследования получали из кубитальной вены в стандартных условиях у всех пациенток утром в день операции. Стабилизированные образцы крови хранили при –70 °С до момента исследования. Выделение ДНК из периферической крови проводили сорбентным методом согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Исследование полиморфных участков генов цитокинов проводили с использованием аллель-специфической полимеразной цепной реакции (ПЦР). Был исследован полиморфный вариантC-509T гена TGFB, расположенный в промоторном участке гена и отвечающий за уровень экспрессии соответствующего цитокина. Амплификацию осуществляли согласно инструкции, прилагаемой к коммерческому набору «АмплиСенс-200-1» («ИнтерЛабСервис», Россия), в пробирках типа «Эппендорф» путём ПЦР, используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, описанных в литературе при использовании амплификатора «Терцик МС2» («ДНК-технология», Россия). После проведения ПЦР 8 мкламплификата разделяли в 2 % агарозном геле, содержащем 0,5 мг/мл этидиум бромида, при напряжении 150 B в течение нескольких мин для последующей визуализации в ультрафиолетовом свете, подтверждающей наличие продукта амплификации. В качестве маркера размера ДНК использовали плазмидуp UC19, расщепленную рестриктазой MspI («Сибэнзим», Россия).

Для проверки нормальности распределения показателей использовали критерий Колмогорова-Смирнова; равенство выборочных средних проверяли по t-критерию Стьюдента (в случае нормального распределения) и U-критерию Манна–Уитни (при отклонении распределения от нормального). Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с эндометриозом сравнивали частоты аллелей и генотипов в группах женщин, используя критерий χ2 с поправкой Йетса на непрерывность. Об ассоциации разных генотипов и аллелей с заболеванием судили по величине отношения шансов (oddsratio (OR)) с расчетом для него 95 % доверительного интервала (CI).

Результаты исследования и их обсуждение

В патогенезе генитального эндометриоза важная роль принадлежит нарушениям иммунного гомеостаза, в том числе и генетически обусловленным, предрасполагающим к определенному ответу иммунной системы на формирование эндометриоидных гетеротопий, их инвазию и распространение. В последние годы большое внимание уделяется изучению роли полиморфизма генов цитокинов в механизмах формирования эндометриоидных очагов [1, 4, 9].

Нами были получены следующие результаты. Для полиморфизма С-509Т гена TGFВ у женщин с бесплодием было выявлено преобладание гомозиготного генотипа CС (62,6 %), в то время как редким генотипом оказался TT(6,6 %), аналогичную тенденцию имело распределение частот встречаемости генотипов в группе пациенток, страдающих эндометриоз-ассоциированным бесплодием (табл. 1).

В то же время у женщин с эндометриоз-ассоциированным бесплодием генотип ТТ и аллель Т полиморфизма С-509Тгена TGFВ выявлялись значимо чаще (χ2 = 5,49; р < 0,05; и χ2 = 6,36; p < 0,05 соответственно), чем у пациенток контрольной группы (см. табл. 1).

Было установлено, что концентрация TGF-β в сыворотке крови значимо выше в группе пациенток со спаечным процессом (р < 0,001; р < 0,05). При этом наибольшее содержание интерлейкина в сыворотке крови имело место среди женщин-носителей генотипа ТТ (pCC/TT < 0,05; pTT/CT < 0,05).

На следующем этапе нашего исследования был проведен анализ взаимосвязи полиморфизма С-509Тгена TGFВ со спаечным процессом органов малого таза у женщин с эндометриоз-ассоциированным бесплодием (табл. 2).

В результате исследования нами была установлена ассоциация генотипов полиморфизма С-509Т гена TGFВ со спаечным процессом органов малого таза различной степени тяжести. У 75 женщин с эндометриоз-ассоциированным бесплодием имел место спаечный процесс органов малого таза различной степени. Зарегистрировано, что у 80 % носителей генотипа ТТ локуса С-509Т гена TGFВ, ответственного за высокую продукцию TGF-β, был выявлен спаечный процесс органов малого таза, в тоже время у 60,2 % носителей генотипа СС он отсутствовал. Однако среди женщин-носителей генотипа СС спаечный процесс был обнаружен у 39,8 % (табл. 2).

Таблица 1

Распределение генотипов и аллелей полиморфизма С-509Тгена TGFВ (абс., %) среди обследованных женщин

Примечание: n – количество человек в группе. Анализ качественных независимых данных проводили с помощью критерия хи-квадрат Пирсона. р – уровень статистической значимости различий между группами. Статистически значимые различия считали при р < 0,05.

Таблица 2

Распределение генотипов полиморфизма С-509Тгена TGFВ (абс., %) среди женщин с эндометриоз-ассоциированным бесплодием и спаечным процессом органов малого таза

Примечание: n – количество человек в группе. Анализ качественных независимых данных проводили с помощью критерия хи-квадрат Пирсона. р – уровень статистической значимости различий между группами. Статистически значимые различия считали при р < 0,05. χ2 = 13,592; р < 0,05; χ2 = 8,359; pCC/TT < 0,05; χ2 = 8,233; pCC/СT < 0,05; χ2 = 2,674; pCT/TT > 0,05.

Таким образом, выявленные нами закономерности позволяют определить вероятность развития не только эндометриоз-ассоциированного бесплодия, но и спаечного процесса органов малого таза, что может быть включено в программу обследования женщин с бесплодием.

Рецензенты:

Сотникова Л.С., д.м.н., профессор кафедры акушерства и гинекологии ФПК и ППС ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Томск;

Воронкова О.В., д.м.н., профессор кафедры патофизиологии ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Томск.

Работа поступила в редакцию 07.03.2013.

Библиографическая ссылка