Научный журнал

Фундаментальные исследования

ISSN 1812-7339

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,674

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Шаповаленко Е.С. 1 Антонова А.А. 1 Стрельникова Н.В. 1

---

1 ГБОУ ВПО «Дальневосточный медицинский государственный университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Исследован бактериальный состав биотопов патологических зубодесневых карманов у 432 пациентов при пародонтитах разной степени тяжести в течение 2013 г. в регионе Хабаровского края, в возрасте от 20 до 70 лет. В составе микробиомов выявлены бактерии рода Leptotrichia и другие микроорганизмы: Streptococcus anginosus, экологическая группа кокков Streptococcus viridans, гемолитические Streptococcus pyogenes группы А, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterococcus faecalis и некоторые другие виды. Анализировалось как наличие отдельных видов микроорганизмов, так и их ассоциации с лептотрихиями. При тяжёлых формах пародонтитов в 91,5 % случаев выявлялись бактерии Streptococcus pyogenes, а также Leptotrichia spp. – в 78,5 % случаев и патогенные Staphylococcus aureus – в 50 % случаев. При пародонтитах средней степени выделены Streptococcus pyogenes – в 81,4 % случаев, Leptotrichia spp. в 84,7 % случаев, Staphylococcus aureus – в 49 %, группа Streptococcus viridans – в 45 % случаев. Отмечается увеличение частоты встречаемости лептотрихий в микробиоценозе при утяжелении патологического процесса в зубодесневых карманах. Так, при пародонтитах лёгкой степени Leptotrichia spp. выявлена в 47,4 % случаев, при пародонтитах средней степени – в 84,7 % случаев, а при пародонтитах тяжёлой степени – в 78,95 % случаев. Выявлено, что при пародонтитах лёгкой степени наиболее часто бактерии рода Leptotrichia вступают в ассоциации с бактериями Streptococcus viridans. При средних и тяжёлых формах пародонтитов – со Streptococcus pyogenes группы А и Staphylococcus aureus.

Статья в формате PDF

308 KB

пародонтит

микробиом зубодесневых карманов

Leptotrichia spp.

Streptococcus pyogenes группы А

Staphylococcus aureus

1. Аболмасов Н.Г. Современные представления и размышления о комплексном лечении заболеваний пародонта / Н.Г. Аболмасов, H.H. Аболмасов, П.Н. Гелетин, A.A. Соловьев // Российский стоматологический журнал. – 2009. – № 5. – С. 26-32.

2. Александров М.Т. Определение антимикробной активности препаратов, используемых в комплексном лечении больных пародонтитом // Стоматология. – 2009. – Т. 88. – № 2. – С. 13–15.

3. Ахметова Д.М. Эффективность озонированного оливкового масла в лечении хронического генерализованного пародонтита лёгкой и средней степени тяжести: автореф. дис. ... канд. мед. наук. – Казань, 2008. – 21 с.

4. Гончарова Е.И. Препараты лекарственных растений в стоматологической практике: учебное пособие. – М.: Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства, 2008. – 45 с.

5. Стрельникова Н.В. Микробиологические свойства потенциальных патогенов человека рода Leptotrichia: автореф. дис. ... канд. мед. наук. – Владивосток, 2010. – С. 3–5.

6. Стрельникова Н.В., Антонова А.А., Холодок Г.Н., Кольцов И.П., Алексеева И.Н. Способ культивирования бактерий рода Leptotrichia – резидентов микрофлоры полости рта // Патент России № 2441908 С2. – 2012. – 11 с.

7. Хватова В.А. Патогенетические принципы лечебно-профилактической помощи больным с патологией пародонта // Маэстро стоматологии. – 2008. – № 4. – С. 65–68.

8. Чепуркова O.A. Особенности микробиоценоза пародонтального кармана при генерализованном пародонтите средней степени тяжести / O.A. Чепуркова, М.Г. Чеснокова, В.Б. Недосеко // Институт стоматологии. – 2007. – № 3. – С. 86–88.

9. Янушевич О.О. Антимикробная терапия и профилактика осложнений воспалительных заболеваний пародонта: учебное пособие / О.О. Янушевич, Р.В. Ушаков, В.Н. Царев. – М., 2009. – 57 с.

10. Янушевич О.О. Стоматологическая заболеваемость населения России. Состояние тканей пародонта и слизистой оболочки рта / под ред. проф. О.О. Янушевича. – М., 2009. – С. 228.

Пародонтит – стоматологическое заболевание, распространённость и интенсивность которого неуклонно растёт, несмотря на профилактические, диагностические, лечебные, научно-исследовательские мероприятия пародонтологической службы [10]. Такая тенденция прослеживается по причине воздействия на макроорганизм не только местных, но и общих, а также социальных факторов, оказывающих влияние на развитие процесса и риск рецидивов [1].

По своей природе полиэтиологические и мультифакторные заболевания пародонта представляются непростой терапевтической задачей для современного практикующего пародонтолога [3]. Ведущим фактором, ускоряющим развитие воспалительных заболеваний пародонта, является зубной налёт и другие отложения на эмали зубов, в основе которых выявлены бактерии рода Leptotrichia, относящиеся к семейству Fusobacteriaceae. На поверхность длинных, грам-негативных палочек прикрепляются другие, более мелкие бактерии – кокки и палочки, а также грибы рода Саndida, что облегчает формирование биоплёнок [2]. В Хабаровском крае в разных группах населения выявление лептотрихий у здоровых детей и взрослых составило от 95 до 99,7 % [5]. Встречаемость лептотрихиозов слизистых оболочек полости рта в 1998 году составляла 47 случаев на 100 000 населения, в 2010 году – 52 случая на 100 000 населения [5]. Рост числа больных в регионе, преобладание рецидивирующих, хронических форм заболеваний и частые обострения, устойчивость к стандартной терапии свидетельствуют о недооценивании роли бактерий рода Leptotrichia в развитии воспалительных заболеваний слизистых оболочек полости рта и тканей пародонта, это поднимает вопросы детального изучения биологических особенностей фузобактерий рода Leptotrichia [5].

Цель исследования: изучить роль бактерий рода Leptotrichia в видовом составе микроорганизмов зубодесневых карманов при пародонтитах различной степени тяжести.

Материалы и методы исследования

Клиническое обследование стоматологического и пародонтологического статуса основными и дополнительными методами диагностики проведено у 432 пациентов в возрасте от 20 до 70 лет, с диагнозом пародонтит. Пациенты распределены на 3 группы исследования по степени тяжести заболевания:

1) 95 человек с пародонтитом тяжёлой степени;

2) 183 человека с пародонтитом средней степени;

3) 154 человека с пародонтитом лёгкой степени.

Биоматериал для бактериологического исследования – содержимое патологических зубодесневых карманов, забирали в стерильную пробирку Deltalab с транспортной средой Стюарта, в течение 1–2 часов доставляли в бактериологическую лабораторию. Из полученного материала делали разведения 10–3–10–5 стерильным 0,89 % раствором NaCl. Первичный посев материала из приготовленных разведений осуществляли калиброванной бактериологической петлей (0,2 мм, ёмкость 0,005 мл) на поверхность пластинчатой среды «Уриселект», производства «Bio-Rad» (Франция), методом секторных посевов на четыре сектора, каждый раз обжигая петлю, в 90 мм чашки Петри и далее инкубировали первичные посевы в анаэробных и микроаэрофильных (5–10 % СО2) условиях, topt = + 35... + 37 °С в течение 48–72 часов [6]. На хромогенной питательной среде колонии Escherichia coli имели красный цвет, колонии Enterococcus faecalis выявляли по тёмно-фиолетовому цвету, размеру от 1 до 5 мм, по морфологии – круглые, с ровным краем, гладкие, блестящие. Колонии Leptotrichia на пластинчатой среде «Уриселект» отличались по морфологии и представляли мелкие, диаметром от 0,3 до 3 мм, как правило, яркого голубого цвета, матовые, в проходящем свете непрозрачные. Край колонии под микроскопом неровный, фестончатый, микроскопическая структура колонии мелко волокнистая. Колонии Staphylococcus aureus имели обычную морфологию и были окрашены в белый цвет.

Для выявления факторов патогенности Staphylococcus aureus, посев первичного материала дополнительно проводили на маннитол-солевой агар (HiMedia, Индия). Через 18–24 часа на среде образовывались гладкие, выпуклые, ярко-жёлтые колонии, диаметром от 1 до 4 мм, вокруг колоний регистрировали зоны лецитиназной активности.

Для выявления Streptococcus pyogenes первичный посев проводили на 5 % кровяной агар путём нанесения материала на 1/6 кровяного агара с помощью петли штрихом и разнесением материала в 4-х квадрантах, осуществляемым полуколичественным методом. На поверхность кровяного агара после первичного посева наносили диск с бацитрацином-S. Инкубировали 24 часа при температуре topt = + 35... + 37 °С, выявлялась зона просветления шириной 2–3 мм вокруг мелких точечных колоний за счёт бета-гемолиза эритроцитов стрептолизинами O и S. Streptococcus anginosus образовывали очень мелкие колонии, зона гемолиза вокруг которых значительно превышала размеры колонии. Streptococcus viridans представлял собой разнородную группу зеленящих оральных стрептококков, вокруг мелких серых колоний которых наблюдали зону неполного, альфа-гемолиза, имеющего серо-зелёный или зелёный цвет. Данные исследований обрабатывались в программах Статистика 6, Microsoft Excel 2010.

Результаты исследования и их обсуждение

Доля пациентов с пародонтитами тяжёлой степени составила в группе из 432 исследуемых 36 % ± 5,31 %, с пародонтитами средней степени – 42 % ± 5,6 %, лёгкой степени – 22 % ± 3,9 %.

Фузобактерии рода Leptotrichia выявили в 47,4 % клинических случаев при пародонтитах лёгкой степени, у обследованных с пародонтитами средней степени тяжести – в 84,7 % случаев и тяжёлой степени – в 78,9 % случаев, эти данные представлены в таблице. Streptococcus pyogenes группы А определялся у обследованных с пародонтитами тяжёлой степени в 91,6 % случаев, с пародонтитами средней степени – в 81,4 % случаев и у пациентов с пародонтитами лёгкой степени – в 20,8 % случаев (таблица).

Из данных таблицы видно, что Staphylococcus aureus обнаруживали при пародонтитах лёгкой степени тяжести в 51,9 % случаев, при пародонтитах средней степени – в 49,2 % случаев, при пародонтитах тяжёлой степени – в 56,84 % случаев. В случае выявления золотистого стафилококка из патологических десневых карманов достоверного различия между степенями тяжести течения пародонтитов не выявлено, поскольку стафилококк регулярно выделяли у половины пациентов в каждой из групп обследованных.

По данным таблицы, у обследованных лиц с пародонтитом лёгкой степени Streptococcus viridans выявлялся в 50,65 случаев, его доля уменьшалась при пародонтитах средней степени тяжести до 37,2 % случаев, и до 28,4 % случаев при тяжёлой.

Видовой состав бактерий микробиома зубодесневых карманов при пародонтитах

Примечание. *Статистически значимые различия рассчитаны по отношению к пародонтиту лёгкой степени, p < 0,001.

Streptococcus anginosus определяется в 42,9 % случаев при пародонтите лёгкой степени. Данные подтверждают разнообразие видового состава микрофлоры содержимого патологических зубодесневых карманов, в основном это условно-патогенная микрофлора полости рта. В дальнейшем при развитии патологического процесса, S. anginosus утрачивает своё патогенетическое значение и обнаруживается при пародонтитах средней степени тяжести в 27,32 случаях, при пародонтитах тяжёлой степени – в 15,79 случаях, каждый раз его патогенный потенциал снижается в два раза.

Enterococcus faecalis выявляли в 18,58 % случаев при средней степени тяжести, 30,53 % – при пародонтитах тяжёлой степени, случаев выявления энтерококков при лёгком течении пародонтита – нет.

Энтеробактерии Escherichia coli выявляли в 16,39 % случаев при средней степени тяжести, в 27,37 % – при пародонтитах тяжёлой степени, нет случаев выявления кишечных палочек при лёгком течении пародонтитов. Тем не менее имеется тенденция увеличения представительства энтерококков и кишечных палочек в микробиоме зубодесневых карманов в случае утяжеления процесса примерно в 2 раза.

Выводы и обсуждение

1. В регионе Хабаровского края по степени тяжести проявления патологического процесса наиболее частыми являются пародонтиты средней степени тяжести, их число представлено 42 % случаями по данным нашего исследования.

2. Фузобактерии рода Leptotrichia выявили в 47,4 % клинических случаев при пародонтитах лёгкой степени, в 84,7 % случаев при пародонтитах средней степени тяжести, в 78,9 % случаев – тяжёлой степени, что свидетельствует о ведущей роли лептотрихий в поддержании патологического процесса и возникновения рецидивов.

3. Преимущественное выявление фузобактерий рода Leptotrichia при пародонтитах средней степени тяжести, 84,7 % случаев, может свидетельствовать о недостаточном собственном патогенном потенциале лептотрихий – нормальных обитателей полости рта.

4. Патогенность фузобактерий рода Leptotrichia значительно возрастает в случае их симбиоза с пиогенными кокками – стрептококками и стафилококками.

5. Streptococcus pyogenes группы А определяется преимущественно при пародонтитах тяжёлой степени – в 91,6 % случаев и пародонтитах средней степени – в 81,4 %.

6. Регулярно, в 51,9; 49,2; 56,84 % случаев соответственно степеням тяжести пародонтитов, выявляется Staphylococcus aureus, что подтверждает его патогенетическую роль в развитии пародонтитов в нашем регионе, наряду с лептотрихиями.

7. Стрептококки экологической группы Streptococcus viridans наибольшую роль играют при пародонтитах лёгкой степени, выявляются в 50,65 ± 1,8 случаев заболеваний.

8. Выявляемость энтерококков и кишечных палочек возрастает пропорционально тяжести патологического процесса.

Заключение

Высокая степень распространённости лептотрихозов в полости рта у здоровых жителей Хабаровского края увеличивает риск обсеменения лептотрихиями слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта у пациентов с пародонтитами. Хотя видовой состав патологических зубодесневых карманов при пародонтитах постоянно меняется, у 47,4–84,7 % пациентов с пародонтитами различой степени тяжести в регионе Хабаровского края выделяются фузобактерии рода Leptotrichia. Следовательно, этиологическая значимость лептотрихий имеет региональное значение для нашего края. Роль лептотрихий в развитии и течении пародонтитов, возникновении рецидивов и осложнений недооценивается. В этой связи требуется более детальное изучение данного вида микроорганизмов и особенностей его ассоциативных взаимодействий с другими участниками пародонтопатогенного симбиоза.

Рецензенты:

Юркевич А.В., д.м.н., профессор кафедры ортопедической стоматологии, ГБОУ ВПО «ДВГМУ» Минздрава РФ, г. Хабаровск;

Холодок Г.Н., д.м.н., профессор, НИИ охраны материнства и детства, г. Хабаровск.

Работа поступила в редакцию 15.07.2014.

Библиографическая ссылка