Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА Р53 ПРИ ГЕНИТАЛЬНОМ ЭНДОМЕТРИОЗЕ

Наследникова И.О. 1 Ильяди Е.Б. 1 Уразова О.И. 1 Ткачев В.Н. 1 Евтушенко И.Д. 1 Новицкий В.В. 1 Кублинский К.С. 1
1 ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российский Федерации
С привлечением современных молекулярно-генетических методов проведено исследование распределения аллелей и генотипов полиморфного варианта G72C гена р53 у 200 женщин, страдающих генитальным эндометриозом, и 100 женщин без эндометриоза, проживающих на территории Томской области и г. Томска. У больных генитальным эндометриозом выявлено статистически значимое увеличение частоты встречаемости «патологического» аллеля Сполиморфизма G72C гена р53. Установлено, что риск развития генитального эндометриоза связан с наличием в генотипе женщины аллеля С и генотипа СС полиморфного варианта G72C гена р53. Подверженность тяжелому течению генитального эндометриоза (3–4 степень распространения процесса согласно классификации Американского общества фертильности RAF-S) ассоциирована с аллелем С и генотипом СС полиморфизма G72C гена р53.
генитальный эндометриоз
полиморфизм гена р53
1. Адамян Л.В., Кулаков В.И., Андреева Е.Н. Эндометриозы. – М.: Медицина. 2006. – 416 с.
2. Ищенко А.И., Кудрина Е.А. Эндометриоз: современные аспекты. – М., 2008.
3. Agic A., Djalali S., Diedrich K., Hornung D. Apoptosis in endometriosis // Gynecol. Obstet. Invest. – 2009. – Vol. 68 (4). – Р. 217–223.
4. Ammendola M., Gloria-Bottini F., Sesti F. et al. Association of p53 codon 72 polymorphism with endometriosis // Fertil. Steril. – 2008. – Vol. 90(2). – Р. 406–408.
5. Gallegos-Arreola M.P., Figuera-Villanueva L.E., Puebla-Pérez A.M. et al. Association of TP53 gene codon 72 polymorphism with endometriosis in Mexican women // Genet. Mol. Res. – 2012. – Vol. 11(2). – P. 1401–1408.
6. Govatati S., Chakravarty B., Deenadayal M. et al. Р53 and risk of endometriosis in Indian women // Genet. Test.Mol. Biomarkers. – 2012. Vol. 16(8) – P. 865–873.
7. Nasu K., Yuge A., Tsuno A., Nishida M., Narahara H. Involvement of resistance to apoptosis in the pathogenesis of endometriosis // Histol. Histopathol. – 2009. – Vol. 24 (9) – Р. 1181–1192.
8. Nisolle M., Alvarez M.L., Colombo M., Foidart J.M. Pathogenesis of endometriosis // Gynecol. Obstet. Fertil. – 2007. – Vol. 35 (9) – Р. 898–903.
9. RibeiroJúnior C.L., Arruda J.T., Silva C.T., Moura K.K. Analysis of p53 codon 72 gene polymorphism in Brazilian patients with endometriosis // Genet. Mol. Res. – 2009. – Vol. 8(2) – Р. 494–499.
10. Zubor P., Hatok J., Galo S. et al. Anti-apoptotic and pro-apoptotic gene expression evaluated from eutopic endometrium in the proliferative phase of the menstrual cycle among women with endometriosis and healthy controls // Eur. J. Obstet. Gynecol.Reprod. Biol.– 2009. – Vol. 145(2) – Р. 172–176.

Эндометриоз в последние годы прочно занял лидирующие позиции в структуре гинекологических заболеваний, поражая от 5 до 50 % женщин репродуктивного возраста и являясь наиболее частой причиной бесплодия [1, 2, 8]. Эндометриоз характеризуется разрастанием ткани, подобной эндометрию, за пределами полости матки в результате избыточной пролиферации на фоне гормонального дисбаланса. Этиология и патогенез данной патологии до конца не выяснены, однако показано, что в развитии эндометриоза существенную роль играют генетические факторы [1, 7, 8].

Современные исследователи склонны расценивать автономный рост очагов эндометриоза как результат отсутствия адекватного контроля за пролиферацией и дифференцировкой клеток гетеротопий со стороны организма женщины. Эндогенная и экзогенная регуляция апоптоза, уравновешивающего эффекты клеточной пролиферации, элиминации поврежденных и функционально неполноценных клеток, является актуальным аспектом исследований патогенеза эндометриоза [7, 8, 10].

Установлено, что эндометриоидные клетки не находятся в «пролиферативном хаосе», они переходят на интра-, ауто- и паракринный механизмы регуляции своего роста, что выражается в утрате контактного торможения и иммортализации [1, 10]. Очаги эндометриоза становятся непосредственными продуцентами факторов роста, цитокинов, онкобелков при отсутствии экспрессии гена-супрессора p53, инициируя нарушения равновесия органов и тканей брюшной полости, усугубляя имеющийся иммунодефицит. Формируется порочный круг, способствующий приживлению новых частиц эндометриоидной ткани, распространению уже имеющихся эктопий, формированию глубокоинвазивных и распространенных форм эндометриоза [1, 7].

Поиск молекулярно-биологических маркеров может дать дополнительную информацию о биологическом поведении эндометриоидных гетеротопий: скорости роста, способности к инвазии и рецидивированию. Активно обсуждается прогностическое значение полиморфных вариантов и мутаций генов-маркеров апоптоза, ангиогенеза, пролиферации при эндометриозе. В связи с этим целью настоящего исследования явилось выявление ассоциации полиморфных вариантов гена р53 с риском возникновения и неблагоприятного течения генитального эндометриоза.

Материал и методы исследования

В программу исследования вошли 300 женщин репродуктивного возраста, проживающих на территории Томской области и г. Томска, находившихся на стационарном лечении в гинекологической клинике ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России. Основную группу составили 200 женщин с наружным генитальным эндометриозом. В группу контроля включено 100 женщин, которым проводилась диагностическая лапароскопия по поводу синдрома хронической тазовой боли, бесплодия и у которых не было выявлено органической патологии, а также женщины, которым проводилась добровольная хирургическая стерилизация. Всем женщинам была проведена лапароскопия по стандартной методике с использованием аппаратуры фирмы «KarlStorz» (Германия) и последующим гистологическим исследованием операционного материала. У всех женщин было получено добровольное информированное согласие на забор венозной крови и использование её для проведения исследований. Кровь для исследования получали из кубитальной вены в стандартных условиях утром в день операции. Выделение ДНК из периферической крови проводили согласно инструкции, прилагаемой к набору «ДНК-сорб-В» («ИнтерЛабСервис», Россия). Определение вариантных генотипов гена p53 С72G осуществляли методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием олигонуклеотидных праймеров к участку гена (forward 5’-ATG-AAG-CTC-CCA-GAA-TGC-3 и reverse: 5’-GCC-GGT-GTA-GGA-GCT-3’) и зондов, комплиментарных участку в амплифицируемой ДНК (5’-FAM-CTG-CTC-CCC-GCG-TGG-CCC-3’ и 5’-ROX-CTG-CTC-CCC-CCG-TGG-CCC-3’). Смесь для амплификации (15 мкл) содержала 100–200 нг ДНК, 2,5 нМ каждого праймера, 2,0 нМ каждого зонда, 1 мМ смесь четырёх dNTP, 1мМ MgCl2, 0,8 ед. акт. Taq-ДНК-полимеразы («Лаборатория Медиген», Россия) и 10×буфер, поставляемый производителем в наборе с ферментом. Программа амплификации включала 1 мин предварительной денатурации при 94 °С и 42 цикла: 94 °С – 10 с, 58 °С – 15 с, 72 °С – 10 с. Кривые накопления флуоресцентного сигнала анализировались с помощью программного обеспечения амплификатора ДТ-96 («ДНК-технология», Россия).Статистическую обработку данных проводили с использованием стандартных алгоритмов биометрии. Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди‒Вайнберга с помощью точного теста Фишера. Для анализа ассоциации маркеров исследуемых генов с эндометриозом сравнивали частоты аллелей и генотипов в группах больных и здоровых индивидов, используя критерий χ2 с поправкой Йетса на непрерывность. При численностях генотипов менее пяти использовали точный тест Фишера.

Результаты исследования и их обсуждение

Сохранение целостности и первоначальной структуры ДНК невозможно без участия регуляторов клеточного цикла, обеспечивающих баланс в продвижении клетки по циклу и смены одной фазы на другую. Сбалансированное регулирование смены клеточного цикла обеспечивает нормальное функционирование всех систем клетки [3]. Одним из ключевых генов, обеспечивающих стабильность генома, является ген р53, кодирующий белок Р53, вовлеченный в регуляцию путем остановки клеточного цикла в контрольных точках для осуществления репарации ДНК, либо индукции апоптоза в случае невозможности устранения повреждений [4, 5]. Наличие полиморфных вариантов генов, участвующих в регуляции клеточного цикла, обеспечивает индивидуальную особенность в восприимчивости клетки и организма в целом к факторам внешней и внутренней среды и другим особенностям реализации метаболических, репаративных и митотических событий [4, 5, 6, 9].

Результаты проведенного нами исследования по изучению распределения аллелей и генотипов полиморфизма G72C гена р53 у женщин без эндометриоза позволили зарегистрировать преобладание генотипа GG (70 %) над СG (30 %), при этом гомозиготный генотип по аллелюC выявлен не был (табл. 1).

Таблица 1

Распределение генотипов и аллелей полиморфизма G72C гена р53 (абс., %) у женщин с генитальным эндометриозом

Генотипы и аллели полиморфизма G72C гена р53

Характеристика обследованных лиц

χ2, p

OR (95 % CI)

Женщины без эндометриоза n = 100

Женщины с эндометриозом n = 200

GG

70 (70,00)

110* (55,00)

10,90

p < 0,05

0,52

(0,31–0,87)

GC

30 (30,00)

70 (35,00)

 

1,26

(0,75–2,11)

CC

0 (0,00)

20* (10,00)

 

22,83

(1,37–381,47)

G

15 (15,00)

55(27,50)

11,65

p < 0,05

2,50

(1,38–3,36)

Примечание: n – количество человек в группе. Анализ качественных независимых данных проводили с помощью критерия χ2 Пирсона. р – уровень статистической значимости различий между группами. * – статистически значимые различия относительно соответствующего показателя у здоровых женщин. Статистически значимые различия считали при р < 0,05. OR – критерий отношения шансов, отражающий относительный риск развития заболевания при определенном генотипе по сравнению с группой контроля с 95 % доверительным интервалом.

У женщин с генитальным эндометриозом распределение генотипов полиморфного сайта G72C гена р53 оказалось аналогичным: преобладал генотип GG (55 %), реже встречался генотип GC (35 %). Однако обращало на себя внимание, что редкий генотип CC был выявлен у 10 % женщин с генитальным эндометриозом (табл. 1).

При сравнительной оценке распределения генотипов и аллелей полиморфного участка G72C гена р53 у женщин с генитальным эндометриозом наблюдалось снижение частоты генотипа GG и появление генотипа CC (χ2 = 10,90, p < 0,05) и преобладание редкого аллеля C (χ2 = 11,65, p < 0,05). Кроме того, была показана положительная ассоциация генитального эндометриоза с аллелем С (OR = 2,50) и генотипом СС (OR = 22,83) полиморфизма G72C гена р53. ГенотипGG (OR = 0,52) обладал протективным эффектом в отношении генитального эндометриоза (см. табл. 1).

Для оценки распределения аллелей и генотипов изучаемого нами полиморфизма G72C гена р53у больных генитальным эндометриозом в зависимости от степени распространения процесса проводили исследование, предварительно разделив пациенток на две группы согласно классификации Американского общества фертильности R-AFS (1985г.). Результаты оценки распределения приведены в табл. 2.

Таблица 2

Распределение генотипов и аллелей полиморфизма G72C гена р53 (абс., %) у женщин с генитальным эндометриозом различной степени распространения (R-AFS, 1985 г.)

Генотипы и аллели полиморфизма G72C гена р53

Характеристика обследованных лиц

Женщины без эндометриоза n = 100

Женщины с эндометриозом 1–2 ст. n = 107

Женщины с эндометриозом 3–4 ст. n = 93

GG

70(70,00)

67 (62,60)

43*# (46,20)

OR (95 % CI)

 

0,72

(0,40–1,28)

0,37

(0,20–0,67)

GC

30 (30,00)

35 (32,7)

35 (37,60)

OR (95 % CI)

 

1,13

(0,63–2,04)

1,41

(0,77–2,56)

CC

0(0,00)

5 (4,70)

15*#(16,10)

OR (95 % CI)

 

10,79

(0,59–197,62)

39,69

(2,34–673,64)

χ2, р

 

5,22

p > 0,05

21,61

p < 0,05

G

15 (15,00)

22 (21,00)

32 (34,90)

χ2, р

 

2,53

p > 0,05

20,67

p < 0,001

OR (95 % CI)

 

1,51

(0,91–2,51)

3,04

(1,86–4,98)

Примечание: n – количество человек в группе. Анализ качественных независимых данных проводили с помощью критерия χ2 Пирсона. р – уровень статистической значимости различий между группами. * – статистически значимые различия относительно соответствующего показателя у здоровых женщин. # – статистически значимые различия относительно соответствующего показателя у женщин с эндометриозом 1–2 степени распространения процесса. Статистически значимые различия считали при р < 0,05. OR – критерий отношения шансов, отражающий относительный риск развития заболевания при определенном генотипе по сравнению с группой контроля с 95 % доверительным интервалом.

Было выявлено, что среди пациенток, страдающих генитальным эндометриозом 3‒4 степени распространения процесса, имелись значимые различия в распределении аллелей (χ2 = 20,67, р < 0,001) и генотипов (χ2 = 21,61, р < 0,05) данного полиморфного сайта относительно группы контроля (табл. 2). Отмечалось значимое снижение частоты встречаемости генотипаGG и увеличение генотипа СС полиморфного сайта G72C гена р53 как по сравнению с женщинами без эндометриоза, так и с женщинами с генитальным эндометриозом 1‒2 степени распространения (р < 0,05) (см. табл. 2).

Выявлена также положительная ассоциация тяжёлого течения эндометриоза с аллелем С (OR = 3,04) и генотипом СС (OR = 39,69) полиморфизма G72C гена р53. Генотип GG имел протективное значение в отношении 3–4 степени распространения генитального эндометриоза (OR = 0,37) (см. табл. 2).

Таким образом полученные нами результаты свидетельствуют о том, что риск развития генитального эндометриоза ассоциирован с наличием в генотипе женщины аллеля С и генотипа СС полиморфного варианта G72C гена р53. Подверженность тяжелому течению генитального эндометриоза (3–4 степень распространения процесса) статистически связана с аллелем С и генотипом СС полиморфизма G72C гена р53.

Согласно полученным данным относительно распределения полиморфных вариантов гена клеточного цикла у больных генитальным эндометриозом было выявлено значимое увеличение частоты встречаемости «патологического» аллеля С гена р53, выполняющего центральную регуляторную функцию в клеточном цикле, зачастую именуемого в литературе «хранителем генома» [10]. Аналогичные результаты были получены в популяции бразильских и мексиканских женщин, больных генитальным эндометриозом [5, 9], однако у индийских пациенток с данной патологией ассоциации эндометриоза с «патологическим» аллелем гена р53 обнаружено не было [6].

Основная функция р53 состоит в остановке клеточного цикла и увеличении продолжительности премитотической фазы для осуществления репарационного синтеза. Активированный белок Р53 способен через несколько механизмов влиять на регуляцию клеточного цикла [3, 4, 5, 10]. Опосредованно с белком Р21 он участвует в остановке клеточного цикла в точке перехода фазы G1 в S и запуске репарационных событий, взаимодействуя с белками DDB2 и GADD45A, тормозит прохождение клетки по клеточному циклу; регулирует гибель клетки как через рецепторы, непосредственно запускающие вешний путь апоптоза, (Fas/Apo-1, DR5, DR10, DR11), так и через проапоптотические регуляторные механизмы внутреннего пути (Bcl-2, Bax, PUMA, Noxa, Bid, каспазы-6, Apaf-1, PIDD) [3, 10].

Важной функцией р53 является также регуляция взаимодействия с окружающими клетками и воспринимаемыми клеткой эндокринных и паракринных сигналов. Показано, что увеличение содержания белка р53 или отдельных продуктов генов, экспрессия которых находится под контролем р53, приводит к блоку сигнального пути, ответственного за восприятие транскрипционных факторов [5, 9, 10].

Влияние минорного варианта гена р53 заключается в ослаблении контроля за продвижением по клеточному циклу и предопределяет тем самым снижение качества репарации ДНК аппарата клетки [4, 9]. Зачастую у пациенток с эндометриозом мутации гена p53 на фоне повышения экспрессии онкогенов –С-myc, С-fos – приводят к усилению пролиферации эндометриоидных клеток с возможной злокачественной трансформацией.

Рецензенты:

Воронкова О.В., д.м.н., профессор кафедры патофизиологии, ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Томск;

Куценко И.Г., д.м.н., профессор кафедры акушерства и гинекологии, ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Томск.

Работа поступила в редакцию 14.02.2013.


Библиографическая ссылка

Наследникова И.О., Ильяди Е.Б., Уразова О.И., Ткачев В.Н., Евтушенко И.Д., Новицкий В.В., Кублинский К.С. ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА Р53 ПРИ ГЕНИТАЛЬНОМ ЭНДОМЕТРИОЗЕ // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 3-1. – С. 134-137;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=31163 (дата обращения: 18.11.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074