Вопросы профилактики и лечения тромбогеморрагических заболеваний и синдромов приобретают особое значение в связи со значительной их частотой, особенностями течения и тяжелыми отдаленными последствиями. Тромбоз является результатом сложных взаимоотношений и взаимодействий разнообразных этиологических факторов и патогенетических механизмов. Основным звеном первичного гемостаза являются тромбоциты, регулирующие агрегатное состояние крови за счет способности изменять гемостатический потенциал, который способствует сохранению жидкого состояния крови в норме или гемокоагуляции при определенных патологических состояниях [1].

Производные ксантина нашли широкое применение в качестве средств, корректирующих активность сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза [2]. Одним из современных направлений в разработке новых лекарственных средств является синтез аналогов и производных применяемых лекарственных препаратов. В ранее опубликованных работах [3, 4] представлены данные, характеризующие зависимость «структура-активность» для применяемых в медицине производных ксантина. Эти результаты лежат в основе дальнейшего поиска корректоров функциональной активности тромбоцитов среди производных ксантина для создания на их основе высокоэффективных лекарственных препаратов.

Цель: оценить влияние 8 синтезированных производных ксантина на систему гемостаза in vitro и сравнить с применяемыми в медицине лекарственными препаратами.

Объекты исследования - лекарственные препараты: пентоксифиллин, кофеин бензоат натрия, эуфиллин, а также производные ксантина, впервые синтезированные на кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета.

Материал и методы исследования

Исследование влияния на функциональную активность тромбоцитов проводили in vitro по методу Born на агрегометре «Thromlite-1006A» на донорской крови человека [7]. Метод основан на регистрации изменения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы до и после введения индуктора агрегации тромбоцитов. В качестве индуктора агрегации использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл, производства «Технология-Стандарт», г. Барнаул (рис. 1А). Определение активности исследуемых производных проводили в концентрации 2⋅10^-3 М/л. При анализе агрегатограмм обращали внимание на спонтанную агрегацию тромбоцитов, вызванную введением исследуемого вещества в плазму, рассчитывали степень подавления или усиления агрегации под действием производных ксантина, оценивали дезагрегационный эффект соединений [5].

Исследование антикоагуляционной активности проводили in vitro стандартными коагуляционными методами на турбометрическом гемокоагулометре Solar CGL 2110 на донорской крови человека. Проводилось определение активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), протромбинового времени (ПВ) и концентрации фибриногена по A. Clauss [6]. Определение антикоагуляционной активности исследуемых производных проводили в конечной концентрации 10^-3 г/мл.

Препараты сравнения: в качестве антикоагулянта использовали «Гепарин натрия» (производства ОАО «Синтез», Россия), в качестве антиагрегантов - пентоксифиллин, кофеин-бензоат натрия, эуфиллин (ОАО «Дальхимфарм», Россия). Определение влияния на функциональную активность тромбоцитов и плазменный компонент гемостаза проводили на 6 пробах крови разных доноров для каждого соединения. Данные показателей статистически обрабатывали с применением t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты исследования влияния производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов представлены в табл. 1.

Из табл. 1 видно, что все производные ксантина в данной концентрации проявляют антиагрегационную активность. Среди препаратов сравнения наибольшую активность оказал пентоксифиллин. При предварительной инкубации пентоксифиллина в обогащенной тромбоцитами плазме в течение 3 мин, происходило снижение агрегации в среднем на 50,0 % относительно контроля (рис. 1б).

Среди впервые синтезированных производных ксантина наибольшую активность проявило соединение М-23. Введение 2⋅10^-3 М/л вещества в кювету агрегометра за 3 мин до индуктора приводит к подавлению агрегации тромбоцитов в среднем на 20,0 % относительно контроля (рис. 2а). Это превышает показатели антиагрегационной активности препаратов сравнения - кофеин-бензоат натрия и эуфиллина.

Таблица 1

Влияние производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов

Примечание: данные достоверны (р < 0,05).

а                 б

Рис. 1: а - агрегация тромбоцитов индуцированная АДФ (контроль);
б - агрегация тромбоцитов в присутствии пентоксифиллина

Эуфиллин проявил в данной концентрации наименьшую антиагрегационную активность среди применяемых в настоящее время метилксантинов и уступает ряду впервые синтезированных соединений (рис. 2б).

Результаты исследования влияния соединений на плазменный компонент гемостаза представлены в табл. 2.

Соединения показали различное влияние на плазменный компонент гемостаза, проявляющееся в изменении показателя внутреннего пути свертывания крови - АПТВ. На показатели ПВ и концентрацию фибриногена в данной концентрации значимого влияния соединений не регистрировалось.

а                           б

Рис. 2: а - агрегация тромбоцитов в присутствии М-23;
б - агрегация тромбоцитов в присутствии эуфиллина

Таблица 2

Влияние производных ксантина на плазменный компонент гемостаза

Примечание: данные достоверны (р < 0,05).

Среди впервые синтезированных производных ксантина найдены соединения, превосходящие по антиагрегационной активности ряд применяемых в настоящее время препаратов. Кроме этого, соединения оказывают влияние и на плазменный компонент гемостаза. Полученные результаты свидетельствуют о более широком антитромботическом потенциале новых производных ксантина.

Таким образом, установлено различное влияние впервые синтезированных производных ксантина на систему гемостаза, выявлены активные соединения. Полученные данные расширяют информационное поле предыдущих исследований и позволяют более детально анализировать зависимость «структура-активность» в перспективе, что в очередной раз убеждает в необходимости и актуальности дальнейших исследований среди производных ксантина.

Список литературы

1. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1988. - 528 с.
2. Государственный реестр лекарственных средств. - М., 2004. - Т. 2. - С. 1141-1142.
3. Поиск зависимости «структура-активность» производных ксантина в отношении адгезивно-агрегационной функции тромбоцитов / А.В. Самородов, Ф.Х. Камилов, Ф.А. Халиуллин, А.З. Саитгалина // Химия и медицина: тезисы докладов VIII Всероссийской конференции. - Уфа, 2010. - С. 96-97.
4. Синтез солей (3-метилксантинил-8-тио)уксусных кислот, содержащих тиетановый цикл, и их влияние на агрегацию тромбоцитов / Г.А. Тимирханова, А.В. Самородов, Ф.Х. Камилов, Ф.А. Халиуллин // Башкирский химический журнал. - 2008. - Т. 15, № 3. - С. 63-65.
5. Поляков А.Е, Черняк В.А. Метод исследования агрегационной функции тромбоцитов // Лабораторное дело. - 1989. - № 10. - С. 19-20.
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ; под общ. ред. Р.У. Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - С. 461-476.
7. Воrn G.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal // Nature. - 1962. - Vоl. 194,48З2. - Р. 924-929.

Рецензенты:

Фазлыев М.М., д.м.н., профессор, начальник госпиталя ФГУЗ «Медико-санитарная часть МВД по Республике Башкортостан», г. Уфа;

Никитина И.Л., д.м.н., профессор, директор филиала ФГУ «Консультативно-методический центр лицензирования» Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития по Республике Башкортостан, г. Уфа.

Работа поступила в редакцию 28.04.2011.