В настоящее время в мировой медицинской практике применяется значительное количество мягких лекарственных форм в качестве средств для местного лечения и профилактики заболеваний кожи, мягких тканей и слизистых оболочек различной этиологии. Одним из перспективных направлений в разработке новых лекарственных средств для местного применения, в частности в стоматологии, является использование иммунотропных препаратов, что обосновано быстро формирующейся резистентностью организма к антибактериальным средствам, снижением иммунологической реактивности населения, наличием маскирующих форм иммунопатологии, обусловливающих прогрессирование патологии и терапевтическую толерантность; при этом отмечается, что местное использование иммунотропных средств часто является более эффективным, чем системное введение, когда возможны выраженные побочные эффекты.

В Институте органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН разработаны фармакологически активные кремнийсодержащие глицерогидрогели [5, 8], проявляющие выраженную противовоспалительную, ранозаживляющую и регенерирующую активность. Они могут быть использованы как самостоятельные лекарственные средства для местного применения, так и в качестве мазевых основ.

В настоящее время кремнийсодержащий глицерогидрогель формального состава Si(C3H7O3)4·6C3H8O3·24H2O (препарат «Силативит») проходит клинические испытания в качестве средства для местного лечения воспалительных стоматологических заболеваний [3]. С целью внедрения данного средства в медицинскую практику был составлен полный пакет нормативно-технической документации на субстанцию и препарат «Силативит», включая Фармакопейную статью предприятия; разработана и валидирована методика количественного определения кремния в геле [9].

Учитывая актуальность использования иммунотропных средств для местного применения, нами было предложено и запатентовано новое лекарственное средство для лечения воспалительных заболеваний полости рта с использованием в качестве активного компонента галавита (0,7 мас. %) и в качестве мазевой основы – субстанции препарата «Силативит» [10]. В эксперименте на лабораторных животных была показана безопасность его применения и высокая фармакологическая активность (противовоспалительная, ранозаживляющая и регенерирующая активность) [7].

Целью настоящей работы являлась разработка методики количественного определения галавита в мази на гидрофильной кремнийсодержащей основе и определение ее валидационных характеристик.

Экспериментальная часть

Содержание галавита в разрабатываемом средстве определяли методом УФ спектроскопии на спектрофотометре фирмы Shimadzu: UV-2401 PС (Япония) в области 400–190 нм. Предварительно готовили калибровочные растворы (водные растворы субстанции галавита), регистрировали их спектры и строили калибровочную кривую (рисунок). Калибровку проводили по полосе поглощения 297 нм, характерной для субстанции галавита.

Калибровочный график зависимости степени абсорбции от концентрации галавита (C) в исследуемом растворе

Методика количественного определения галавита основана на его исчерпывающей водной экстракции из разрабатываемого средства. 2 г (точная навеска) разрабатываемого средства растворяют в 50 мл дистиллированной воды и перемешивают на магнитной мешалке в течение 1 часа. Затем полученную водную суспензию оставляют для осаждения на сутки. После отстаивания 1 мл надосадочного раствора помещают в мерную колбу на 50 мл и доводят объем водой до метки. Концентрацию галавита в надосадочной жидкости определяют из калибровочного графика (рисунок). Содержание галавита в разрабатываемом средстве в процентах (X) вычисляют по формуле:

где М – молярная масса галавита, г/моль; Vмк1 – объем мерной колбы 1, л; Vмк2 – объем мерной колбы 2, л; С – концентрация галавита в водном извлечении, моль/л; Vал – объем аликвоты, л; a – навеска мягкой лекарственной формы, г.

Для валидации методики готовили модельные смеси (№ 1–3), состоящие из субстанции галавита и кремнийсодержащего глицерогидрогеля, содержащие соответственно 80, 100 и 120 % определяемого компонента (аналитическая область определения), по отношению к их содержанию в разрабатываемом средстве, а также «плацебо», не содержащую субстанцию галавита.

Расчет метрологических характеристик и валидационную оценку методики количественного определения галавита проводили на пяти образцах каждой модельной смеси по показателям: специфичность, аналитическая область, линейность, правильность и прецизионность [1, 2, 4, 6, 11].

В табл. 1 приведены данные количественного определения галавита в модельных смесях (№ 1–3). Для каждой модельной смеси было проведено по 5 параллельных определений.

Результаты исследования и их обсуждение

В табл. 2 приведены данные статистической обработки результатов количественного определения галавита в модельных смесях.

Специфичность определяли на примере модельной смеси «плацебо» по методике, описанной выше. Во всех случаях отсутствовала полоса поглощения в области 297 нм, что подтверждает специфичность методики.

Таблица 1

Результаты количественного определения галавита в модельных смесях

Таблица 2

Данные статистической обработки результатов количественного определения галавита в модельных смесях

Установлено, что в пределах аналитической области определения галавита наблюдается линейная зависимость определяемой величины, при этом расчетная величина коэффициента корреляции r отвечает условию |r| ≥ 0,99, и доверительные интервалы лежат в пределах 2 % относительно значения определяемой величины.

Для оценки правильности анализировали модельные смеси № 1–3, содержащие соответственно 80, 100 и 120 % определяемого компонента (галавита). Валидируемая методика может быть признана правильной, поскольку определяемые экспериментально значения лежат внутри доверительных интервалов, соответствующих средним результатам анализа. Рассчитанные значения tвыч. оказались меньше табличного (tтабл = 2,36 при Р = 95 %, f = 8), что позволяет с вероятностью 95 % сделать вывод об отсутствии значимой систематической ошибки.

Прецизионность оценивали на модельных смесях № 1–3 по величине стандартного отклонения результата отдельного определения и относительной ошибки результата отдельного определения. Установлено, что относительная ошибка не превышает 2,28 % от истинного значения измеряемой величины.

Метрологические характеристики методики количественного определения галавита в разрабатываемом средстве приведены в табл. 3.

Выводы

Разработана методика количественного определения галавита в мази на гидрофильной кремнийсодержащей основе методом УФ спектроскопии. Обоснованность методики подтверждена результатами определения таких валидационных характеристик как специфичность, аналитическая область, линейность, правильность и прецизионность. Разработанная методика может быть рекомендована для включения в нормативно-техническую документацию для контроля качества разрабатываемого средства.

Таблица 3

Метрологические характеристики методики количественного определения галавита в разрабатываемом средстве

Рецензенты:

Петров А.Ю., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармации фармацевтического факультета, ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Екатеринбург;

Левит Г.Л., д.х.н., ведущий научный сотрудник, ФГБУН Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, г. Екатеринбург.

Работа поступила в редакцию 08.11.2013.