Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,087

COMPUTER ANALYSIS OF IMAGE OF NEUTROPHILIC LEUCOCYTES IS IN ESTIMATION OF CHARACTER OF FLOW AND PROGNOSIS OF ERYSIPELAS

Manaeva D.A. 1 Goukova L.I. 1 Slavinsky A.A. 1
1 Kuban State Medical university, Krasnodar
Проведен анализ мазков периферической крови пациентов с различными клиническими формами рожи в период разгара заболевания и после проведенного лечения. C помощью метода компьютерной цитоморфометрии установлено существенное снижение функционально-метаболического потенциала нейтрофилов вне зависимости от формы и тяжести заболевания. Изменение интегрального цитохимического показателя (ИЦП) в начальном периоде заболевания соответствует тяжести патоморфологической формы рожи, а в реконвалесцентном периоде – и тяжести, и кратности течения заболевания, а также позволяет уточнять характер течения болезни и оценивать эффективность проведенного лечения. Показатели ИЦП нейтрофильных лейкоцитов больных рецидивирующей рожей можно использовать в качестве прогностического критерия хронического течения заболевания.
The analysis of dabs of peripheral blood of patients with a various clinical forms of erysipelas taken before and after the treatment is carried out by a method of a computer cytomorphometry . Essential decrease in is functional-metabolic potential of neutrophils is established without dependence from the form and weight of disease Change of an integrated cytochemical index (ICI) in a disease initial stage corresponds to weight of forms, and in and frequency rates of a current of disease, and allows to specify weight of a clinical course and to estimate efficiency of the spent medical actions. The average level of indicators ICI leukocytes of patient with recurrent erysipelas could be used as the forecast of a chronic clinical course.
myeloperoxidase
alkaline phosphatase
cationic proteins
erysipelas

Механизмы развития рожи, особенно ее хронического течения, окончательно не установлены [1]. Ряд авторов связывают характер течения инфекционного процесса при роже с многогранными изменениями в иммунной системе [2, 3, 5, 7, 8]. В то же время исследования при роже отдельных показателей иммунитета, в частности, активности нейтрофильных лейкоцитов крови, немногочисленны и ограничиваются интерпретацией количественных показателей ферментов в этих клетках [4]. В этом отношении компьютерная цитоморфометрия, позволяющая объективно оценивать цитохимическую активность нейтрофильных лейкоцитов с помощью определения не только числа гранул фермента, но и их внутриклеточного распределения и размеров [6], дает возможность расширить представления о механизмах развития заболевания, способствовать улучшению диагностики тяжести и прогноза течения болезни, оценки эффективности лечения.

Цель исследования: установить динамику изменения структурно-цитохимических признаков активации нейтрофильных лейкоцитов крови больных рожей в зависимости от формы заболевания.

Материалы и методы исследования

87 пациентов с рожей, лечившихся в ГУЗ СКИБ г. Краснодара (первичная- 38, повторная - 24, рецидивирующая - 25; эритематозная - 53, эритематозно-геморрагическая - 2, эритематозно-буллезная - 20, буллезно-геморрагическая - 12). При поступлении (исследование № 1) и после проведенного лечения (исследование №2) у больных определяли признаки активации антибактериальных систем нейтрофилов крови методом компьютерной микротелефотометрии (Славинский А.А., 2002). Активность миелопероксидазы определяли дианизидиновым методом по Шафран М.Г., Пигаревскому В.Е., Блинковой Э.Н. (1979), щелочной фосфатазы с помощью цитохимической реакции азосочетания по методике М.Г. Шубича (1965). Содержание неферментных катионных белков определяли с помощью анионного красителя амидо черного 10 Б по методике А.А. Славинского и Г.В. Никитиной (1999). Рассчитывали интегральный цитохимический показатель (ИЦП) цитохимической реакции на миелопероксидазу (МП), щелочной фосфатазу (ЩФ), катионные белки (КБ) в относительных единицах. Также 30 пациентам проводили исследование стандартных показателей иммунограммы. Группу контроля составили 30 доноров крови.

Результаты исследования и их обсуждение

Интегральный цитохимический показатель (ИЦП) МП в начале заболевания достоверно превышал показатель здоровых людей при первичной (1,2 ± 0,1 отн. ед. против 5,50 ± 0,04 отн. ед., р < 0,05), повторной (1,0 ± 0,1 отн. ед. против 5,50 ± 0,04, р < 0,05) и рецидивирующей роже (1,1 ± 0,1 отн. ед. против 5,50 ± 0,04 отн. ед., р < 0,05) (рис. 1).

pic

Рис. 1. Активность МП, ЩФ и содержание КБ при роже в остром периоде
в зависимости от кратности заболевания

ИЦП КБ в эти же сроки заболевания составил при первичной роже 2,0 ± 0,1 отн. ед., при повторной - 2,3 ± 0,2 отн. ед., при рецидивирующей - 2,2 ± 0,1 отн. ед. (против 3,6 ± 0,6 отн. ед. в контроле, р < 0,05 во всех случаях), а ИЦП ЩФ соответственно 4,4 ± 0,4, 4,0 ± 0,5 и 4,0 ± 0,4 (против 1,30 ± 0,04 отн. ед. в контроле, р < 0,05 во всех случаях). Таким образом, содержание КБ и активность МП были достоверно меньшими, а активность ЩФ у больных с различными по кратности формами рожи достоверно большей по сравнению со здоровыми. Следует отметить, что достоверных различий аналогичных показателей между больными первичной, повторной и рецидивирующей формами не отмечалось. При этом существенно, что такие лабораторные маркеры системной воспалительной реакции, как уровень лейкоцитоза и процент незрелых форм нейтрофилов, а также частота и продолжительность клинических признаков местного воспаления в виде гиперемии и отека у больных рожей с различной кратностью течения не имели значимых различий.

У больных эритематозной, эритематозно-буллезной и буллезно-геморрагической формами рожи отмечалось достоверное снижение по сравнению контролем ИЦП МП (1,3 ± 0,1 отн. ед., 0,8 ± 0,1 отн. ед., и 0,7 ± 0,1 отн. ед. против 5,50 ± 0,04 отн. ед., и ИЦП КБ (2,3 ± 0,1 отн. ед., 1,7 ± 0,2 отн. ед. И 1,1 ± 0,2 отн. ед. против 3,6 ± 0,6 отн. ед., р < 0,05 во всех случаях) (рис. 2).

pic

Рис. 2. Активность МП, ЩФ и содержание КБ при различных формах рожи в остром периоде

Прослеживалась закономерность - ИЦП МП и ИЦП КБ снижались по мере утяжеления патоморфологической формы рожи от эритематозной до буллезно-геморрагической. Так, например, ИЦП МП и ИЦП КБ больных эритематозной формой рожи были достоверно выше аналогичных показателей больных буллезно-геморрагической рожей (0,7 ± 0,1 отн. ед. против 1,3 ± 0,1 отн. ед., р < 0,05 и 2,3 ± 0,1 отн. ед. против 1,1 ± 0,2 отн. ед., р < 0,05). При исследовании ИЦП ЩФ выявлено достоверное повышение показателя при эритематозной, эритематозно-буллезной и буллезно-геморрагической формах рожи по сравнению с контролем (3,7 ± 0,2 отн. ед., 4,7 ± 0,5 отн. ед. и 6,4 ± 1,2 отн. ед. против 1,30 ± 0,04 отн. ед., р < 0,05 во всех случаях). Отмечалась закономерность - ИЦП ЩФ повышался по мере утяжеления патоморфологической формы рожи. В частности, ИЦП ЩФ больных эритематозной и эритематозно-буллезной формами рожи достоверно превышал ИЦП ЩФ больных буллезно-геморррагической формой рожи (3,7 ± 0,2 отн. ед. и 4,7 ± 0,5 отн. ед. против 6,4 ± 1,2 отн. ед., р < 0,05 в обоих случаях).

В реконвалесцентном периоде показатели ИЦП МП при первичной, повторной и рецидивирующей формах рожи повышались, но не достигали нормальных значений (2,1 ± 0,2 отн. ед., 1,8 ± 0,2 отн. ед. и 1,1 ± 0,1 отн. ед. против 5,50 ± 0,04 отн. ед. в контроле, р < 0,05 во всех случаях) (рис. 3).

pic

Рис. 3. Активность МП, ЩФ и содержание КБ при роже в периоде реконвалесценции
в зависимости от кратности заболевания

При этом содержание лейкоцитов и нейтрофилов у перечисленных групп пациентов не имели достоверных различий

Факт отсутствия полного восстановления бактерицидных свойств нейтрофильных лейкоцитов в период выздоровления указывает на несоответствие патоморфологической и клинической реконвалесценции.

При этом наиболее высокими оказались значения ИЦП МП при первичной роже, которые достоверно превышали показатель при рецидивирующей роже (2,1 ± 0,2 отн. ед. против 1,1 ± 0,1 отн. ед., р < 0,05). Аналогичную динамику имел ИЦП КБ, составивший соответственно 2,4 ± 0,2, 1,9 ± 0,2 отн. ед. и 1,7 ± 0,2 отн. ед. против 3,6 ± 0,6 отн. ед. в контроле. ИЦБ КБ больных первичной рожей достоверно превышал ИЦП КБ больных рецидивирующей рожей (2,4 ± 0,2 отн. ед. против 1,7 ± 0,2 отн. ед., р < 0,05). ИЦП ЩФ в период реконвалесценции при первичной, повторной и рецидивирующей роже снижался, но не достигал нормальных показателей (2,6 ± 0,2 отн. ед., 3,0 ± 0,4 отн. ед. и 3,0 ± 0,4 отн. ед. против 1,30 ± 0,04 отн. ед., р < 0,05 во всех случаях). Примечательно, что в меньшей степени нормализация ИЦП ЩФ происходила при повторной и рецидивирующей роже.

В динамике болезни при эритематозной, эритематозно-буллезной и буллезно-геморрагической формах рожи наблюдалась тенденция к нормализации показателей - увеличение ИЦП МП, ИЦП КБ и снижение ИЦП ЩФ по сравнению с начальным периодом заболевания (рис. 4).

pic

Рис. 4. Активность МП, ЩФ и содержание КБ при различных формах рожи
в периоде реконвалесценции

При этом показатели больных буллезно-геморрагической формой рожи изменялись наименее значимо по сравнению с аналогичными показателями больных эритематозной и эритематозно-буллезной формами рожи. ИЦП МП и ИЦП ЩФ у реконвалесцентов буллезно-геморрагической формой рожи достоверно отличались от соответствующих показателей реконвалесцентов эритематозной формой рожи (1,2 ± 0,2 отн. ед. против 2,0 ± 0,2 отн. ед. и 4,3 ± 0,2 отн. ед. против 2,4 ± 0,2 отн. ед., р < 0,05 в обоих случаях).

Анализ показателей иммунограмм показал, что при рецидивирующей роже имеется тенденция к ранней активации нейтрофилов, что подтверждается также высокими уровнями активности ЩФ, маркерного фермента активации нейтрофилов. Так, показатель стимуляции при рецидивирующей роже 2,58 ± 1,25 в сравнении с первичной формой 1,38 ± 0,04. Данный факт позволяет думать о ранней дегрануляции нейтрофилов при рецидивах заболевания. Вследствие ранней активации и преждевременной дегрануляции нейтрофилы достигают очага воспаления, израсходовав запас содержимого гранул. Данный факт объясняет выявленную нами тенденцию к снижению процента фагоцитарного киллинга, который отражает способность нейтрофилов к лизису захваченных бактерий
в фагосомах. Так, при при рецидивирующей роже 65,04 ± 1,34 в сравнении с первичной 66,8 ± 1,71 следует отметить, что процент фагоцитоза при рецидивах заболевания не имеет аналогичной тенденции к снижению в сравнении с первичными формами. Таким образом, есть основания полагать, что при сохранении возможности к осуществлению фагоцитоза при рецидивирующих формах страдает фагоцитарный киллинг. Достоверных различий фагоцитарной и киллинговой активности при различных патоморфологических формах не выявлено.

Выводы

При всех клинических формах рожи выявлено существенное снижение функционально-метаболического потенциала, определяемое методом компьютерной цитоморфометрии. Изменение активности ферментов и содержания катионных белков в начальном периоде заболевания соответствует тяжести патоморфологической формы рожи, а в реконвалесцентном периоде - и тяжести и кратности течения заболевания. Таким образом, выраженность изменений ИЦП позволяет уточнять тяжесть течения болезни. Установлено несоответствие по срокам клинического и патоморфологического выздоровления при роже, что указывает на сохранение угнетения антибактериальных систем нейтрофилов и после клинического выздоровления. Средний уровень показателей ИЦП нейтрофильных лейкоцитов больных рецидивирующей рожей можно использовать в качестве прогноза хронического течения болезни. Анализ динамики показателей функциональной активности нейтрофилов показал, что при рецидивирующей роже имеется тенденция к ранней активации и дегрануляции нейтрофилов при рецидивах заболевания.

Рецензенты:

Лебедев В.В., д.м.н., зав. кафедрой инфекционных болезней с курсом эпидемиологии ФПК и ППС ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России,
г. Краснодар;

Городин В.Н., д.м.н., главный врач ГУЗ «Специализированная клиническая инфекционная больница», г. Краснодар.

Работа поступила в редакцию 19.07.2011.