Хроматин из ядер клеток печени мышей фракционировали по прочности связывания с ядерным матриксом с помощью растворов с низкой ионной силой и предварительной активацией эндогенной Ca2+/Mg2+ ДНКазы [1;4]. В результате экстракции ТМ-буфером с добавлением NaCl возрастающей концентрации выделены следующие фракции хроматина: транскрипционно активный хроматин-(Хр-А), транскрипционно не активный хроматин - (Хр-Н). Первая фракции составляет окол 80 % активно транскрибирующего хроматина ядра. Липиды экстрагировали методом Блайя-Дайера с применением смеси хлороформ-метанол (1:2, по объему) и разделяли с помощью двумерной хроматографии в тонких слоях силикагеля. Количественно липиды определяли спектрофотометрическим методом по содержанию неорганического фосфора, РНК определяли с орцином, ДНК по Дише [3].
Показано, что во фракции Хр-А присутствуют фосфатидилхолин (30 %), фосфатидилинозит (4,9 %), сфингомиелин (6,6 %), фосфатидилэтаноламин (23,1 %), кардиолипин (20,1 %), лизоформы фосфатидилхолина (15,65 %).
Показано, что во фракции Хр-Н доля фосфатидилхолина понижается до 24 %, содержание фосфатидилинозита составляет (13,8 %), сфингомиелина (15,1 %), резко возрастает уровень фосфатидилэтаноламина до (39,5 %), кардиолипи понижается до (11,9 %), лизоформы фосфатидилхолина не выявляются.
При этом Хр-А содержит 232 мкг липида /мг ДНк хроматина, что существенно отличает его от Хр-Н который содержит 125 мкг липида /мг ДНК.
Таким образом, транскрипционно активный хроматин характеризуется не только большим разнообразием фосфолипидов но и количеством с вязанных с хроматином фосфолипидов, чем в транскрипционно неактивный. Он характеризуется низким содержанием фосфатидилсерина, относительно высоким содержание фосфатидилхолин и его лизоформ.
Более вероятным является представление о липидах хроматина как о некой липидной зоне, мало сообщающейся с остальными липидами ядра, т.е. о связанных с хроматином липидах которые участвуют не только в укладке сперализованной ДНК [2], но и играют важную роль в регуляции активности генетичсекого материала на уровне репликации и транскрипции как у эукареот так и прокариот.
- Бойков П. Я., Костюк В. Г., Терентьев А. А., Шевченко Н. А. Концентрирование протоонкогенов в ядрах гепатоцитов //Молекулярная биология. 1995. Т.29. №5. С. 1137-1144.
- Стручков В.А., Стражевская Н.Б., Структурные и функциональные аспекты ядерных липидов нормальных и опухолевых клеток //Биохимия. 2000.-Т.65. №5. С. 620-643.
- Кейтс М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидов /М.: Мир. 1975. 322 с.
- Борисова Н.П., Костюк В.Г., Шевченко Н.А., и др. Двойственный характер действия эндогенных ДНКаз на транскрипционно активный и неактивный хроматин //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. Т.135. №3. С.294-298.