Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

АЛЛЕЛЬНЫЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА HLA-DRB1 ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛОЛЕЙКОЗЕ

Овсянникова Е.Г. 1 Исрапилова З.М. 1 Заклякова Л.В. 1 Попов Е.А. 1
1 ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия», Астрахань
Проблема резистентности к терапии гливеком у больных хроническим миелолейкозом (ХМЛ) в настоящее время находится в стадии изучения. Несмотря на значительные успехи, достигнутые в результате применения гливека, остается часть больных, не отвечающих на лечение. В работе исследуется аллельный полиморфизм гена HLA-DRB1 у больных ХМЛ, получающих терапию гливеком. Установлено, что резистентность к развитию хронического миелолейкоза маркируется наличием в фенотипе специфичности HLA-DRB1*13(06); маркерами быстрой прогрессии ХМЛ с летальным исходом являются специфичности HLА-DRB1*01 и HLА-DRB1*12(05); ген HLА-DRB1*15(02) обладает протективным эффектом и характеризует благоприятный исход ХМЛ. Иммуногенетическое исследование рекомендуется в качестве дополнительного метода определения прогноза хронического миелолейкоза.
хронический миелолейкоз
гливек
HLA-DRB1
1. Иммуногенетические маркеры предрасположенности к лепре у русских жителей Астраханского региона / Л.В. Сароянц, М.Н. Болдырева, И.А. Гуськова и др. // Иммунология. - 2005. - №5. - С. 263-267.
2. Клиническая онкогематология: Руководство для врачей / под ред. М.А. Волковой. - М.: Медицина, 2001. - 576 с.
3. Отдаленные результаты выживаемости больных в поздней хронической фазе Ph+ хронического миелолейкоза при лечении иматиниб мезилатом (Гливек®) / О.В. Стахина, А.Г. Туркина, Г.А. Гусарова и др. // Вестник гематологии. - 2009. - Т. 5, №2. - С. 42.
4. Результаты многоцентрового исследования терапии гливеком больных хроническим миелолейкозом в хронической фазе / А.Ю. Зарицкий, Е.Г. Ломаиа, О.Ю. Виноградова и др. // Гематология и трансфузиология. - Т. 52, № 2. - С. 13-17.
5. Хаитов P.M., И.И. Дедов, М.Н. Болдырева. Новые представления о функции главного комплекса генов иммунного ответа человека // Молекулярная медицина. - 2006. - № 3. - С. 47-51.
6. Хамаганова Е.Г., Зарецкая Ю.М. Молекулярные механизмы ассоциаций HLA-системы с резистентностью к развитию хронического миелолейкоза // Гематология и трансфузиология. - 2006. - № 1. - С. 12-17.
7. Хронический миелолейкоз - до и после применения иматиниба (часть I) / Е.Г. Ломаиа, Д.В. Моторин, Е.Г. Романова, А.Ю. Зарицкий // Онкогематология. - 2009. - №2. - С. 4-16.
8. Эффективность терапии иматиниба мезилатом (Гливеком) в хронической фазе миелолейкоза / А.Г. Туркина, Н.Д. Хорошко, Г.А. Дружкова и др. // Терапевтический архив. - 2003. - № 8. - С. 62-67.
9. Baccarani M., Pane F., Saglio G. Monitoring treatment of chronic myeloid leukemia // Haematologica. - 2008. - №92. - Р. 161-169.
10. Resistance to tyrosine kinase inhibitors in Philadelphia chromosome-positive leukemias: Which mutations matter? / S. Soverini, M. Baccarani, I. Iacobucci, et al. // Clin Leukemia. - 2007. - №1. - Р. 223-228.

В терапии хронического миелолейкоза (ХМЛ) в настоящее время происходят перемены глобального масштаба. На смену эмпирической терапии пришла таргетная терапия, что значительно улучшает бессобытийную и общую выживаемость больных, выводит их на недоступный ранее уровень качества жизни (3, 9). Главным патогенетическим событием является хромосомная транслокация t (9; 22), (q34; q11). В результате образуется химерный ген BCR-ABL, продукт которого - белок р210 является тирозинкиназой с повышенной активностью. Ведущим эффектом тирозинкиназ является их способность к усилению пролиферации и снижению апоптоза в гемопоэтических предшественниках [2, 7]. Несмотря на улучшение результатов терапии ХМЛ, связанных с применением ингибиторов тирозинкиназ, полный цитогенетический ответ удается получить у 70-87 % больных в хронической фазе [3, 4, 8]. Это определяет необходимость дальнейшего изучения патогенеза злокачественной трансформации клеток и опухолевой прогрессии, а также расшифровки механизмов развития резистентности к терапии ингибиторами тирозинкиназ у больных ХМЛ [10].

В настоящее время не вызывает сомнений, что процесс онкогенеза заключается в патологических изменениях вначале на молекулярном, а затем на клеточном уровне, а предрасположенность к злокачественным новообразованиям и опухолевая прогрессия могут модифицироваться аллельными полиморфизмами различных генов [5]. Одной из наиболее полиморфных генетических систем человека является система HLA. Выявление ассоциативных связей с заболеваниями позволяет использовать продукты HLA не только в качестве маркеров наследственной предрасположенности, но и прогнозировать особенности течения заболеваний. Изучению продуктов HLA у больных гемобластозами посвящено большое количество исследований. В то же время проблема хронического миелолейкоза освещена в единичных работах. В одном из последних исследований показано, что молекулы HLA II класса более, чем молекулы HLA I класса, ассоциируются с резистентностью к развитию ХМЛ [6]. Однако не изучены ассоциативные связи генов HLA II класса у больных хроническим миелолейкозом с развитием резистентности к лечению гливеком.

Цель исследования: изучить аллельный полиморфизм гена HLA-DRB1 у больных хроническим миелолейкозом, получающих лечение гливеком, и определить иммуногенетические маркеры предрасположенности и прогноза.

Материалы и методы исследования

Исследование проводилось на основе собственных наблюдений в период с 2006 по 2011 г. В исследование включены 50 больных ХМЛ русской национальности. Возраст больных колебался от 23 до 78 лет. Средний возраст составлял 50,3 ± 15,0 лет, соотношение мужчин и женщин в исследовании 1:1. Длительность лечения гливеком составила от 1 года до 5 лет. Продолжительность заболевания до начала терапии гливеком была от 0 до 87 месяцев. В качестве контрольных данных были использованы результаты генотипирования 94 доноров - жителей Астраханской области русской национальности [1].

Все больные имели клинико-морфологическое и цитогенетическое подтверждение диагноза хронического миелолейкоза. Характер ответа на лечение определялся согласно критериям Европейского общества по изучению хронического миелолейкоза European Leukemia Net (ELN-2009) [7].

В процессе работы проводились молекулярно-генетические исследования крови методом ПЦР в реальном времени (количественная оценка экспрессии химерного гена BCR-ABL типа р210), ДНК-типирование с помощью метода ПЦР (определение генов HLA II класса); исследования костного мозга: цитологические (миелограмма), цитохимические, цитогенетические (определение транслокации t (9; 22) (q34; q11), молекулярно-цитогенетические (флуоресцентная in situ гибридизация хромосом (FISH) с ДНК зондом к слитному гену BCR-ABL).

Для определения показателя достоверности результатов был использован непараметрический критерий - Х2. Критерий Х2 вычислялся по формуле Holdene, учитывая малый объем выборок, была применена модифицированная формула с поправкой Yates на непрерывность выборки. Значения Х2, превышающие 3,841 (что соответствует р < 0,05) рассматривались как показатель достоверной разницы между частотами в сравниваемых группах. Помимо показателя статистической достоверности, использовался показатель силы ассоциации - RR (relative risk) - относительный риск этиологической фрак- ции - EF (для RR > 1), превентивной фракции - PF (для RR < 1). Величина RR, равная 1, указывает на отсутствие ассоциации. RR > 1 (положительная ассоциация) означает, что ген чаще встречается у больных; если RR < 1, это указывает на снижение частоты гена у больных.

Результаты исследования и их обсуждение

Нами были изучены закономерности распределения аллелей генов HLA-DRB1 у больных хроническим миелолейкозом по сравнению с контрольной группой. Распределение специфичностей представлено в табл. 1.

Таблица 1. Ассоциации аллелей HLA -DRB1 с хроническим миелолейкозом

Аллели HLA

ХМЛ

n = 50

Контроль

n = 94

χ2

RR

EF

PF

N

 %

N

 %

DR B1*01

9

18

14

14,9

0,06

1,27

0,038

-

DRB1*15(02)

8

16

27

28,7

3,61

0,49

-

0,149

DRB1*16(02)

5

10

5

5,3

0,50

1,97

0,049

-

DRB1*17(03)

10

20

10

10,6

1,67

2,09

0,104

-

DRB1*04

7

14

19

20,2

1,32

0,67

-

0,067

DRB1*11(05)

17

34

31

32,9

0,00

1,05

0,017

-

DRB1*12(05)

2

4

3

3,2

0,05

1,35

0,010

-

DRB1*13(06)

11

22

36

38,3

4,71 p < 0,05

0,47

-

0,219

DRB1*14(06)

3

6

0

0

3,19

13,93

0,056

-

DRB1*07

17

34

30

31,9

0,00

1,10

0,032

-

DRB1*08

4

8

4

4,3

0,30

1,95

0,039

-

DRB1*09

3

6

5

5,3

0,05

1,20

0,010

-

DRB1*10

0

0

3

3,2

3,57

0,26

0

0

DRB1*x

4

8

Н/Д

Н/Д

-

-

-

-

Примечание: Н/Д - нет данных.

Как представлено в табл. 1, у больных хроническим миелолейкозом установлена статистически значимая отрицательная ассоциация со специфичностью DRB1*13, по сравнению с контрольной группой 22 % против 38,3 % (RR-0,47, PF-0,219, p < 0,05). Из этого следует, что резистентность к развитию ХМЛ в популяции русских астраханской геногеографической зоны маркируется наличием в фенотипе специфичности DRB1*13. Кроме того, следует отметить, что риск развития ХМЛ в 13,93 раза выше при наличии в генотипе специфичности DRB1*14(06), однако различия не достигли достоверного уровня.

Далее больные были распределены по статусу: «жив»-«умер», с целью определения маркеров благоприятного и неблагоприятного прогноза ХМЛ на фоне проведенной терапии гливеком. На первом этапе исследовалось распределение специфичностей HLА-DRB1 у больных хроническим миелолейкозом, успешно получавших лечение гливеком в течение 5 лет. Полученные данные представлены в табл. 2.

Таблица 2. Генный профиль HLA -DRB1 у больных ХМЛ: статус «жив»

Аллели HLA

Жив n = 44

Контроль n = 94

χ2

RR

EF

PF

n

 %

n

 %

DRB1*01

6

13,6

14

14,9

0,21

0,91

-

0,009

DRB1*15(02)

8

18,2

27

28,7

2,36

0,57

-

0,126

DRB1*16(02)

5

11,4

5

5,3

0,85

2,27

0,063

-

DRB1*17(03)

8

18,2

10

10,6

0,91

1,87

0,085

-

DRB1*04

7

15,9

19

20,2

0,70

0,77

-

0,046

DRB1*11(05)

15

34,1

31

32,9

0,00

1,06

0,019

-

DRB1*12(05)

1

2,3

3

3,2

0,71

0,90

-

0,003

DRB1*13(06)

9

20,5

36

38,3

5,19 p < 0,025

0,43

-

0,232

DRB1*14(06)

3

6,8

0

0

3,73

15,94

0,064

-

DRB1*07

15

34,1

30

31,9

0,00

1,11

0,034

-

DRB1*08

4

9,1

4

4,3

0,55

2,23

0,050

-

DRB1*09

3

6,8

5

5,3

0,00

1,37

0,019

-

DRB1*10

0

0

3

3,2

3,33

0,29

0

0

DRB1*x

4

9,1

Н/Д

Н/Д

-

-

-

-

Примечание: Н/Д - нет данных.

Из табл. 2 следует, что зарегистрировано достоверное снижение частоты HLА-DRB1*13(06) в группе больных ХМЛ, успешно получающих лечение по настоящее время, по сравнению с контрольной группой 20,5 % против 38,3 % (RR-0,43, PF-0,232, p < 0,025). Это подтверждает ранее сделанное нами заключение об отрицательной ассоциации ХМЛ с данным геном. Далее мы проанализировали генный профиль HLА у больных ХМЛ, получавших лечение гливеком и умерших в результате прогрессии заболевания (табл. 3).

Таблица 3. Аллельный полиморфизм HLA -DRB1 у больных ХМЛ: статус «умер»

Аллели HLA

Умер N = 6

Контроль n = 94

χ2

RR

EF

PF

n

 %

n

 %

DRB1*01

3

50

14

14,9

2,75

5,55

0,410

-

DRB1*15(02)

0

0

27

28,7

4,04

p < 0,05

0,19

0

0

DRB1*16(02)

0

0

5

5,3

2,39

1,25

0

0

DRB1*17(03)

2

33,3

10

10,6

1,02

4,47

0,259

-

DRB1*04

0

0

19

20,2

3,10

0,30

0

0

DRB1*11(05)

2

33,3

31

32,9

0,18

1,12

0,036

-

DRB1*12(05)

1

16,7

3

3,2

0,31

7,13

0,143

-

DRB1*13(06)

2

33,3

36

38,3

0,46

0,89

-

0,045

DRB1*14(06)

0

0

0

0

-

-

-

-

DRB1*07

2

33,3

30

31,9

0,14

1,17

0,050

-

DRB1*08

0

0

4

4,3

2,53

1,55

0

0

DRB1*09

0

0

5

5,3

2,39

1,25

0

0

DRB1*10

0

0

3

3,2

2,82

2,01

0

0

DRB1*x

0

0

Н/Д

Н/Д

-

-

-

-

Примечание: Н/Д - нет данных

Как представлено в табл. 3, у умерших больных ХМЛ, получавших лечение гливеком, имеется достоверное снижение по сравнению с контролем частоты HLА-DRB1*15(02) - 0 % против 28,7 % (RR-0,19, p < 0,025). Из этого следует, что ген DRB1*15(02) маркирует благоприятный прогноз ХМЛ. Необходимо отметить, что риск неблагоприятного течения ХМЛ с летальным исходом в 5,5 раза выше при наличии в генотипе группы аллелей HLА-DRB1*01 (RR-5,55, ЕF-0,41) и в 7,13 раза выше при HLА-DRB1*12(05) (RR-7,13, ЕF-0,143), однако различия не достигли статистической значимости. Следующим шагом нашего анализа было сравнение антигенного профиля больных ХМЛ: статус «жив» и «умер» между собой (табл. 4).

Таблица 4. Сравнение аллельного полиморфизма HLA-DRB1 у больных ХМЛ

Аллели HLA

Жив n = 44

Умер n = 6

χ2

RR

EF

PF

N

 %

n

 %

DRB1*01

6

13,6

3

50

7,51 p < 0,01

0,17

-

0,043

DRB1*15(02)

8

18,2

0

0

0,30

3,03

1,122

-

DRB1*16(02)

5

11,4

0

0

0,21

1,81

0,051

-

DRB1*17(03)

8

18,2

2

33,3

2,00

0,42

-

0,215

DRB1*04

7

15,9

0

0

0,18

2,60

0,098

-

DRB1*11(05)

15

34,1

2

33,3

0,18

0,95

-

0,022

DRB1*12(05)

1

2,3

1

16,7

7,83 p < 0,01

0,13

-

0,136

DRB1*13(06)

9

20,5

2

33,3

1,54

0,48

-

0,194

DRB1*14(06)

3

6,8

0

0

0,07

1,10

0,006

-

DRB1*07

15

34,1

2

33,3

0,18

0,96

-

0,022

DRB1*08

4

9,1

0

0

0,001

1,44

0,028

-

DRB1*09

3

6,8

0

0

0,07

1,10

0,006

-

DRB1*10

0

0

0

0

-

-

-

-

DRB1*x

4

9,1

0

0

0,001

1,44

0,028

-

Проведённый анализ показал достоверное снижение в группе больных ХМЛ - «жив» по сравнению с группой «умер» частоты HLА-DRB1*01 - 13,6 % против 50 % (RR-0,17, PF-0,043, p < 0,01) и HLА-DRB1*12(05) - 2,3 % против 16,7 % (RR-0,13, PF-0,136, p < 0,01). Возвращаясь к табл. 2, - данные гены уже проявлялись: в 5,5 и 7,13 раз, соответственно, чаще у умерших больных, но не достигли уровня достоверности.

Анализируя табл. 2, 3, 4, можно сделать заключение, что у больных ХМЛ, получающих лечение гливеком, наличие генов HLА-DRB1*01 и HLА-DRB1*12(05) предполагает быструю прогрессию заболевания с летальным исходом.

Выводы

Резистентность к развитию ХМЛ маркируется наличием в фенотипе специфичности HLA-DRB1*13(06); маркерами быстрой прогрессии ХМЛ с летальным исходом являются специфичности HLА-DRB1*01 и HLА-DRB1*12(05); ген HLА-DRB1*15(02) обладает протективным эффектом и характеризует благоприятный исход ХМЛ; иммуногенетическое исследование может быть внедрено в практику в качестве дополнительного метода определения риска и прогноза хронического миелолейкоза; учитывая полученные данные необходимо продолжить поиск иммуногенетических маркеров прогноза течения ХМЛ

Рецензенты:

  • Астахин А.В., д.м.н., профессор, зам. главного врача по клинико-экспертной работе ГУЗ «Александро-Мариинская областная клиническая больница», г. Астрахань;
  • Эсаулова Т.А., д.м.н., профессор, зав. терапевтической службой НУЗ медико-санитарной части Газпрома, г. Астрахань.

Работа поступила в редакцию 09.09.2011.


Библиографическая ссылка

Овсянникова Е.Г., Исрапилова З.М., Заклякова Л.В., Попов Е.А. АЛЛЕЛЬНЫЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА HLA-DRB1 ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ МИЕЛОЛЕЙКОЗЕ // Фундаментальные исследования. – 2011. – № 10-3. – С. 538-541;
URL: http://www.fundamental-research.ru/ru/article/view?id=28910 (дата обращения: 14.11.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074